影響ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果的三個(gè)因素:
1、ELISA加樣步驟
在ELISA中一般有3次加樣步聚,，即加標(biāo)本,，加酶結(jié)合物，加底物,。凍結(jié)血清融解后,，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均,，應(yīng)充分混勻宜輕緩,，避免氣泡,可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩,。
制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、血塊收縮后即可取得,。也可在板孔中加入稀釋液,，再在其加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和,。
一般說(shuō)來(lái)，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,，超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存,。可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,，體液,、分泌物和排泄物等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份，ELISA試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保留,。
2,、固相載體
加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器,，使加液過(guò)程迅速完成。如有細(xì)菌污染,，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,，以發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣。
良好的儀器和準(zhǔn)確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果正確可靠的必要條件,。ELISA頂用的蒸餾 水或去離子水,，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的,。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定,，有些則需經(jīng)預(yù)處理。
3,、標(biāo)本因素
血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,，應(yīng)留意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)開(kāi)釋出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。
如在冰箱中保留過(guò)久,，其中的可發(fā)生聚合,，在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操縱步驟的留意要點(diǎn),，國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用,，嚴(yán)格遵照劃定操縱，必能得出正確的結(jié)果,。
加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,，避免加在孔壁上部，并留意不可濺出,，不可產(chǎn)氣憤泡,。有此測(cè)定需用稀的血清，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣,。
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