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活性氧檢測(cè)試劑盒的使用說明

閱讀：5831 發(fā)布時(shí)間：2021-1-18

活性氧包括超氧自由基、過氧化氫及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,，參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖,、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程,。活性氧檢測(cè)試劑盒是一種利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測(cè)的試劑盒,。DCFHDA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜,，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后,，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜,，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi),。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。故而檢測(cè)DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平,。活性氧檢測(cè)試劑盒的使用如下：
（1）裝載探針：對(duì)于刺激時(shí)間較短(通常為2小時(shí)以內(nèi))的細(xì)胞,，先裝載探針，后用活性氧陽性對(duì)照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞,。對(duì)于細(xì)胞刺激時(shí)間較長(zhǎng)(通常為6小時(shí)以上)的細(xì)胞,，先用活性氧陽性對(duì)照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞，后裝載探針,。
（2）原位裝載探針
（3）收集細(xì)胞后裝載探針：按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA,，使終濃度為10μM。細(xì)胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中,，細(xì)胞濃度為一百萬至二千萬1×106～2×107/mL,，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下,，使探針和細(xì)胞充分接觸,。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA,。
（4）加藥刺激：直接用活性氧陽性對(duì)照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞,，或把細(xì)胞等分成若干份后刺激細(xì)胞。
（5）檢測(cè)：對(duì)于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察,，或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計(jì),、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

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