藍白斑篩選是重組子篩選的一種方法： 是根據(jù)載體的遺傳特征篩選重組子，如α-互補,、抗生素基因等?，F(xiàn)在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區(qū)段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調(diào)控序列和前146個氨基酸的編碼信息,。在這個編碼區(qū)中插入了一個多克隆位點（MCS）,，它并不破壞讀框，但可使少數(shù)幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能,，這種載體適用于可編碼β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主細胞,。因此，宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒有酶活性,，但它們同時存在時,，可形成具有酶學(xué)活性的蛋白質(zhì)。這樣,，lacZ基因在缺少近操縱基因區(qū)段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區(qū)段的質(zhì)粒之間實現(xiàn)了互補,，稱為α-互補。由α-互補而產(chǎn)生的LacZ+細菌在誘導(dǎo)劑IPTG的作用下,，在生色底物X-Gal存在時產(chǎn)生藍色菌落,，因而易于識別。然而，當外源DNA插入到質(zhì)粒的多克隆位點后,，幾乎不可避免地導(dǎo)致無α-互補能力的氨基端片段,，使得帶有重組質(zhì)粒的細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選,，又稱為藍白斑篩選,。如用藍白斑篩選則經(jīng)連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養(yǎng)12-16hr后，有重組質(zhì)粒的細菌形成白色菌落,。
由α-互補產(chǎn)生的Lac+ 細菌較易識別,，它在生色底物X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)下存在下被IPTG(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)誘導(dǎo)形成藍色菌落。當外源片段插入到載體的多克隆位點上后會導(dǎo)致讀碼框架改變, 表達蛋白失活, 產(chǎn)生的氨基酸片段失去α-互補能力, 因此在同樣條件下含重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子在生色誘導(dǎo)培養(yǎng)基上只能形成白色菌落,。 在麥康凱培養(yǎng)基上,，α-互補產(chǎn)生的Lac+細菌由于含β-半乳糖苷酶，能分解麥康凱培養(yǎng)基中的乳糖,，產(chǎn)生乳酸,，使pH下降，因而產(chǎn)生紅色菌落,，而當外源片段插入后,，失去α-互補能力，因而不產(chǎn)生β-半乳糖苷酶,，無法分解培養(yǎng)基中的乳糖,，菌落呈白色。
藍白斑篩選的分子生物學(xué)基礎(chǔ)是建立在乳糖操縱子正負調(diào)控機制上的：
1,、乳糖操縱子的組成：大腸桿菌乳糖操縱子含Z,、Y、A三個結(jié)構(gòu)基因,，分別編碼半乳糖苷酶,、透酶和半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個操縱序列O,，一個啟動子P和一個調(diào)節(jié)基因I,。2、阻遏蛋白的負性調(diào)節(jié)：沒有乳糖存在時,，基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列O處，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài),，不能合成分解乳糖的三種酶,；有乳糖存在時，乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu),，不能結(jié)合于操縱序列,，乳糖操縱子被誘導(dǎo)開放合成分解乳糖的三種酶。所以,，乳糖操縱子的這種調(diào)控機制為可誘導(dǎo)的負調(diào)控,。3,、CAP的正性調(diào)節(jié)：在啟動子上游有CAP結(jié)合位點，當大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時,，cAMP濃度升高,，與CAP結(jié)合，使CAP發(fā)生變構(gòu),，CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動序列附近的CAP結(jié)合位點,，激活RNA聚合酶活性，促進結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄,，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄,，對乳糖操縱子實行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶,。4,、協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機制，互相協(xié)調(diào),、互相制約,。
可以采用X-Gal而不是X-a-Gal進行Matchmaker System藍白斑篩選嗎？
不可以,，X-Gal與X-a-Gal不同,。X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶（lacZ）的反應(yīng)底物，而X-a-Gal是酵母α-半乳糖苷酶（Mel 1p）的反應(yīng)底物,。X-a-Gal在Matchmaker Gold系統(tǒng)中用作藍白篩選的篩選標記,，在蛋白互作激活MEL1基因表達后，酵母細胞可以分泌表達Mel 1p,。
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