ECL Plus超敏發(fā)光液使用方法：
1、常規(guī)電泳,、轉(zhuǎn)膜,、HRP 標記抗體或核酸探針孵育、洗膜,。注意用 HRP 標記 IgG 或用一抗-鏈親和素 -生物素-HRP 夾心法,。核酸雜交膜用 HRP 標記探針雜交，洗膜,。
2,、在洗滌膜上的 HRP 標記二抗的同時，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液 A 和 B 混合,，放 置使之恢復室溫否則會減弱熒光強度,。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有減 低,。
3,、用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入并與發(fā)光工作液充分接觸（約 0.125ml 發(fā)光工作液/cm2 膜）,。室溫孵育 3 分鐘后立即壓片曝光,。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會 導致曝光條帶異常,。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應,，使用過少的發(fā)光工作液不利于反應進行，也會導致膜上 條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低,。為達節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量,。
4、用鑷子夾起膜,，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液,。但勿洗去發(fā)光液。
5,、在 X 光膠片暗盒內(nèi)面鋪一張面積大于膜的保鮮膜,。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包 裹雜交膜,，去除氣泡和皺褶,，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液,。用膠帶將覆蓋 雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi),，推薦蛋白帶面向上。
6,、在黑暗中放入 X 感光膠片,，分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗,。
ECL Plus超敏發(fā)光液注意事項：
1,、步驟 1-5 可在日光燈下操作；但發(fā)光液暴露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低,，移到暗房操作 可避免,。戴手套可以避免在膜上留下手印,，保持膜的潔凈,。
2、長時間曝光或蛋白質(zhì)過量,，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系,。曝光不足則條帶模糊。 3,、發(fā)光工作液孵育約 3 分鐘后膜上的條帶發(fā)光,。強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光 較弱，肉眼雖不可見但能使 X 膠片曝光,。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間,。肉眼不可見的熒光實際上 可持續(xù)數(shù)小時并使 X 膠片感光，因而弱帶可曝光 1-10 小時,。如果曝光后條帶不佳,，可用洗膜緩沖液洗膜， 重新孵育二抗,，然后重新用 ECL 發(fā)光和曝光,。
4、由于超敏發(fā)光液的高靈敏度,，強烈推薦大多數(shù)進口抗體起始濃度為一抗 1：1000-1：4000,，二抗 1： 2000-1：5000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶,，導致失敗,！ Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd /82 Http://www.solarbio,。。ｃｏｍ
5,、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時會淬滅熒光,，應選擇高質(zhì)量保鮮膜，例如“克林萊”牌保鮮膜,。
6,、使用肉眼可見的預染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標簽可幫助確定膠片上條帶的準確位置 和大小。
7,、NaN3 能抑制 HRP 活性,，回收二抗時應避免使用 NaN3，如必需使用勿超過 0.01%,。
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