熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體,， 使之發(fā)出熒光,， 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收,、運輸,、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 細胞中有些物質(zhì),，如葉綠素等,，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一,。
熒光顯微鏡的使用方法：
1,、打開燈源，超高壓汞燈要預(yù)熱15min才能達到zui亮點；
2,、透射式熒光顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片,，在物鏡的后面裝上相應(yīng)的壓制濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片,、雙色束分離器,、壓制濾片的插塊；
3,、用低倍鏡觀察,，根據(jù)不同型號熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)裝置，調(diào)整光源中心,，使其位于整個照明光斑的*,；
4、放置標(biāo)本片,，調(diào)焦后即可觀察,。使用中應(yīng)注意：未裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷,；用油鏡觀察標(biāo)本時,，必須用無熒光的特殊鏡油；高壓汞燈關(guān)閉后不能立即重新打開,，需待汞燈*冷卻后才能再啟動,，否則會不穩(wěn)定，影響汞燈壽命,；
5,、觀察。例如：在熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片,，觀察到經(jīng)0.01%吖啶橙熒光染料染色的細胞,，細胞核和細胞質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。
熒光顯微鏡的注意事項：
1,、嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作,，不要隨意改變程序；
2,、應(yīng)在暗室中進行檢查,。進入暗室后，接上電源,，點燃超高壓汞燈5～15min,，待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后，眼睛*適應(yīng)暗室,，再開始觀察標(biāo)本,；
3,、防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護眼鏡,；
4,、檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min,，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱,；標(biāo)本受紫外線照射3～5min后,，熒光也明顯減弱；所以,，zui多不得超過2～3h,；
5、熒光顯微鏡光源壽命有限,，標(biāo)本應(yīng)集中檢查,，以節(jié)省時間，保護光源,。天熱時,，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間,。燈熄滅后欲再用時,，須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源,；
6,、標(biāo)本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱,。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā),。長時間的激發(fā)光照射標(biāo)本,，會使得熒光衰減和消失現(xiàn)象，故應(yīng)盡可能縮短照射時間,。暫時不觀察時可用擋光板遮蓋激發(fā)光,；
7、標(biāo)本觀察時候應(yīng)采用無熒光油,，應(yīng)避免眼睛直視紫外光源,；
8、電源應(yīng)安裝穩(wěn)壓器,，電壓不穩(wěn)會降低熒光燈的壽命,。
