日本奧林巴斯生物教學(xué)顯微鏡 BX53 的應(yīng)用技術(shù)如下：

奧林巴斯BX53明場(chǎng)觀察技術(shù)

樣品準(zhǔn)備：對(duì)于細(xì)胞樣品,，可將細(xì)胞培養(yǎng)在載玻片上制成細(xì)胞爬片,；對(duì)于組織樣品,，通常切成薄片,，厚度一般在 5-10 微米,，然后進(jìn)行常規(guī)的蘇木精 - 伊紅（HE）染色等,，以便更好地觀察細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

操作要點(diǎn)：選擇合適的物鏡,，一般先從低倍物鏡如 4 倍或 10 倍開(kāi)始,，將樣品清晰對(duì)焦后，再根據(jù)需要切換到高倍物鏡,。調(diào)節(jié)聚光器的高度和孔徑光闌的大小,，以獲得最佳的光照強(qiáng)度和對(duì)比度，使圖像清晰,、細(xì)節(jié)豐富,。

奧林巴斯BX53暗場(chǎng)觀察技術(shù)

樣品要求：適用于觀察未染色且透明的微小物體，如細(xì)菌,、細(xì)胞內(nèi)的顆粒等,。

操作要點(diǎn)：需要更換為暗場(chǎng)聚光鏡,，如 U-DCD 干式暗場(chǎng)聚光鏡或 U-DCW 油式聚光鏡。將聚光鏡的光闌調(diào)至合適大小,，使光線以傾斜角度照射到樣品上,，只有被樣品散射的光線才能進(jìn)入物鏡，從而使樣品在黑暗的背景下呈現(xiàn)明亮的輪廓,，可觀察到微小結(jié)構(gòu)和折射率的差異,。

奧林巴斯BX53相差觀察技術(shù)

樣品特點(diǎn)：主要用于觀察未經(jīng)染色的活細(xì)胞或透明的生物標(biāo)本，如培養(yǎng)中的細(xì)胞,、原生動(dòng)物等,。

操作要點(diǎn)：使用 uplfln - ph 或 pln - ph 系列相差物鏡以及 u - pcd2 相差 / 暗場(chǎng)聚光鏡,。通過(guò)調(diào)節(jié)相差環(huán)的位置,，使直射光和衍射光之間產(chǎn)生光程差，從而將樣品的密度和厚度差異轉(zhuǎn)化為可觀察的光強(qiáng)變化,，增強(qiáng)圖像對(duì)比度,，能清晰看到細(xì)胞內(nèi)部的細(xì)胞器、細(xì)胞核等結(jié)構(gòu),。

奧林巴斯BX53熒光觀察技術(shù)

樣品處理：對(duì)目標(biāo)生物分子或結(jié)構(gòu)進(jìn)行熒光標(biāo)記,，如用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞中的特定蛋白質(zhì)、核酸等,，或者利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)使細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白,。

操作要點(diǎn)：選擇合適的熒光激發(fā)塊，確保與所使用的熒光染料或熒光蛋白的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)匹配,。打開(kāi)熒光照明光源,，調(diào)節(jié)激發(fā)光的強(qiáng)度和曝光時(shí)間，以獲得清晰,、明亮且無(wú)背景干擾的熒光圖像,。可同時(shí)對(duì)多種染色的標(biāo)本進(jìn)行成像,，通過(guò)切換熒光濾色鏡組,，觀察不同熒光標(biāo)記的結(jié)構(gòu)或分子。

奧林巴斯BX53微分干涉（DIC）觀察技術(shù)

樣品類型：廣泛應(yīng)用于觀察細(xì)胞,、組織切片等具有三維結(jié)構(gòu)的生物樣品,，特別是對(duì)于細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器、細(xì)胞核等結(jié)構(gòu)的觀察效果較好,。

操作要點(diǎn)：需要配備 DIC 光學(xué)組件,，包括 DIC 棱鏡等。調(diào)節(jié) DIC 棱鏡的角度和位置,，使兩束偏振光在樣品上產(chǎn)生干涉,，從而產(chǎn)生具有立體感的圖像,，可清晰地觀察到樣品的細(xì)微結(jié)構(gòu)和形態(tài)變化，呈現(xiàn)出類似浮雕的效果,，能更好地了解樣品的三維結(jié)構(gòu)信息,。

奧林巴斯BX53偏光觀察技術(shù)

樣品特性：適用于觀察具有雙折射特性的生物材料，如牙齒,、骨骼,、肌肉、神經(jīng)組織,、肌動(dòng)球蛋白纖維和有絲分裂的紡錘體等,。

操作要點(diǎn)：安裝偏光附件，如偏光鏡,、補(bǔ)償器等,。將樣品放置在載物臺(tái)上，使光線通過(guò)起偏器變成偏振光,，然后穿過(guò)樣品,，再通過(guò)檢偏器進(jìn)行觀察。通過(guò)旋轉(zhuǎn)載物臺(tái)和調(diào)節(jié)補(bǔ)償器,，可以觀察到樣品在不同角度下的雙折射現(xiàn)象,，分析樣品的晶體結(jié)構(gòu)和分子取向等信息。