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使用奧林巴斯進口顯微鏡 CKX53 觀察組織切片一般有以下步驟:
前期準備
熟悉顯微鏡操作:了解 CKX53 顯微鏡的各個部件及其功能,,如光源調(diào)節(jié)旋鈕,、粗細準焦螺旋,、物鏡轉(zhuǎn)換器,、載物臺調(diào)節(jié)旋鈕等,。
檢查顯微鏡:確保顯微鏡的光源工作正常,,亮度可調(diào)節(jié),。檢查物鏡和目鏡是否干凈,,如有灰塵或污漬,需用專用的擦鏡紙輕輕擦拭干凈,。
準備切片:從切片盒中取出需要觀察的組織切片,,檢查切片是否完整、無破損,,切片上的組織是否有脫落等情況,。確保切片已經(jīng)過合適的染色處理,,如常用的 HE 染色,以便于觀察細胞和組織的形態(tài)結構,。
顯微鏡操作與觀察
放置切片:打開顯微鏡載物臺的壓片夾,,將組織切片平穩(wěn)地放置在載物臺上,使切片上的組織部位正對著通光孔中心,,然后輕輕合上壓片夾,,固定切片。
低倍鏡觀察
調(diào)節(jié)光源:打開光源開關,,通過調(diào)節(jié)亮度旋鈕,,使光線強度適中。一般來說,,開始觀察時,光線不宜過強,,以免影響對組織形態(tài)的整體判斷,。
粗調(diào)焦距:轉(zhuǎn)動粗準焦螺旋,使載物臺上升,,同時從側面觀察物鏡與切片的距離,,直到物鏡接近切片,但不要接觸到切片,,避免壓碎切片或損壞物鏡,。然后通過目鏡觀察,反向轉(zhuǎn)動粗準焦螺旋,,使載物臺緩慢下降,,直到能看到組織切片的大致圖像。
微調(diào)焦距:使用細準焦螺旋進行微調(diào),,使圖像更加清晰,。在低倍鏡下對整個組織切片進行全面觀察,了解組織的整體結構,、形狀,、大小,以及病變組織在整個切片中的大致位置和范圍,,確定需要進一步觀察的區(qū)域,。
中倍鏡觀察
轉(zhuǎn)換物鏡:在低倍鏡下找到感興趣的區(qū)域后,將其移至視野中央,,然后輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,,將低倍物鏡轉(zhuǎn)換為中倍物鏡,通常為 20 倍物鏡,。
重新調(diào)焦:轉(zhuǎn)換物鏡后,,由于不同物鏡的焦距略有差異,可能需要再次微調(diào)細準焦螺旋,使圖像清晰,。在中倍鏡下可以更清楚地觀察組織的層次結構,、細胞的排列方式、組織與組織之間的關系等,,進一步確定病變的具體部位和特征,。
高倍鏡觀察
再次轉(zhuǎn)換物鏡:將中倍鏡下觀察到的重點區(qū)域移至視野中央,轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,,換用高倍物鏡,,一般為 40 倍或更高倍數(shù)的物鏡。
精細調(diào)焦:高倍鏡下視野變小,,圖像放大倍數(shù)更高,,此時只需輕微轉(zhuǎn)動細準焦螺旋,就能使圖像達到最佳清晰狀態(tài),。在高倍鏡下仔細觀察細胞的形態(tài),、大小、細胞核的形態(tài),、染色質(zhì)的分布,、細胞質(zhì)的顏色和質(zhì)地等細節(jié),分析細胞是否存在異常變化,,如細胞形態(tài)的改變,、細胞核的增大或縮小、核仁的明顯程度等,,判斷組織是否存在病變以及病變的類型和程度,。
觀察記錄與結束工作
記錄觀察結果:可以使用顯微鏡自帶的圖像采集系統(tǒng)對典型的觀察圖像進行拍攝保存,也可以通過手繪的方式,,繪制出觀察到的組織細胞形態(tài)和病變特征,,并標注出關鍵結構和病變部位。同時,,在實驗記錄本上記錄下觀察到的主要現(xiàn)象,、病變特征、切片編號等信息,,以便后續(xù)的分析和總結,。
整理顯微鏡:觀察結束后,關閉顯微鏡光源開關,,將物鏡轉(zhuǎn)回到低倍鏡位置,,松開壓片夾,取下切片,,將切片放回切片盒中妥善保存,。用擦鏡紙將物鏡和目鏡擦拭干凈,,如有必要,可使用少量的二甲苯等有機溶劑擦拭沾有油漬或污漬的鏡頭,,但要注意擦拭后及時用干凈的擦鏡紙擦干,,防止溶劑殘留損壞鏡頭。
清理臺面:清理顯微鏡載物臺和周圍的雜物,,保持實驗臺面整潔干凈,。
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