使用奧林巴斯進口顯微鏡 CX43 進行熒光轉(zhuǎn)染觀察,，可按照以下步驟進行操作，以清晰觀察到熒光轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞狀態(tài)及熒光表達(dá)情況：

實驗準(zhǔn)備

確保已完成細(xì)胞的熒光轉(zhuǎn)染操作,，并在合適的時間點將細(xì)胞準(zhǔn)備好用于觀察,。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞需在培養(yǎng)器皿（如培養(yǎng)皿、多孔板）中培養(yǎng),，使其達(dá)到適宜觀察的狀態(tài),。

準(zhǔn)備好顯微鏡配套的熒光濾光片組，根據(jù)所使用的熒光標(biāo)記物選擇合適的濾光片,。常見的熒光標(biāo)記物有綠色熒光蛋白（GFP）,、紅色熒光蛋白（RFP）等，不同的熒光蛋白需要使用對應(yīng)的激發(fā)光和發(fā)射光濾光片,。

打開奧林巴斯顯微鏡 CX43 的電源,，預(yù)熱光源，讓其穩(wěn)定發(fā)光,，同時調(diào)節(jié)顯微鏡的亮度至適中水平,。

放置樣本

將含有轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)器皿小心放置在顯微鏡的載物臺上，使用載物臺上的固定裝置（如玻片夾）將其固定好,，避免在觀察過程中發(fā)生移動,。

通過載物臺的移動旋鈕，將培養(yǎng)器皿中的細(xì)胞區(qū)域移動到物鏡的正下方,，使需要觀察的部位大致處于視野中心位置,。

低倍鏡觀察定位

轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，將低倍物鏡（如 4 倍或 10 倍）轉(zhuǎn)至工作位置,，使其對準(zhǔn)通光孔,。

從側(cè)面注視物鏡，同時轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋,，使載物臺緩慢上升,，直到物鏡接近培養(yǎng)器皿（注意不要讓物鏡碰到培養(yǎng)器皿，一般距離約 0.5 - 1 厘米）,。

從目鏡中觀察,，緩慢轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使載物臺下降,，直到看到模糊的細(xì)胞圖像,。再轉(zhuǎn)動細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使細(xì)胞圖像清晰,。

在低倍鏡下觀察整個細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域,，找到細(xì)胞分布較為均勻且熒光表達(dá)相對明顯的區(qū)域，將其移至視野中央,，以便后續(xù)切換高倍鏡進行詳細(xì)觀察,。

熒光觀察模式切換

確定好觀察區(qū)域后,，切換顯微鏡至熒光觀察模式。根據(jù)所使用的熒光標(biāo)記物,，選擇對應(yīng)的熒光濾光片組,。例如，觀察 GFP 標(biāo)記的細(xì)胞,，需選擇能夠激發(fā)綠色熒光并過濾出相應(yīng)發(fā)射光的濾光片組,。

打開熒光光源，調(diào)節(jié)熒光光源的強度,，避免過強的熒光導(dǎo)致細(xì)胞圖像過曝或熒光淬滅,，同時也要確保能夠清晰觀察到熒光信號。

高倍鏡觀察

轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,，換用高倍物鏡（如 20 倍或 40 倍）進行更詳細(xì)的觀察。由于高倍物鏡的工作距離較短,，此時不能再使用粗準(zhǔn)焦螺旋,，只能通過轉(zhuǎn)動細(xì)準(zhǔn)焦螺旋來微調(diào)焦距，使細(xì)胞和熒光圖像清晰,。

在高倍鏡下仔細(xì)觀察細(xì)胞的形態(tài),、熒光的分布和強度。注意觀察熒光是在細(xì)胞的哪個部位表達(dá),，如細(xì)胞質(zhì),、細(xì)胞核或細(xì)胞膜等，以及熒光的表達(dá)是否均勻,。同時,，觀察不同細(xì)胞之間熒光表達(dá)的差異。

圖像采集與記錄

使用顯微鏡配備的數(shù)碼攝像頭或連接電腦的圖像采集系統(tǒng),，拍攝觀察到的細(xì)胞熒光圖像,。可以拍攝不同視野,、不同曝光時間下的圖像,，以獲取最佳的觀察效果。

在拍攝圖像時,，記錄下圖像的放大倍數(shù),、熒光濾光片組的選擇、曝光時間等參數(shù),，以便后續(xù)對圖像進行分析和對比,。

對拍攝的圖像進行標(biāo)注，注明樣本的來源,、轉(zhuǎn)染的時間,、觀察的時間等信息,，方便實驗數(shù)據(jù)的整理和分析。

觀察結(jié)束與設(shè)備維護

觀察結(jié)束后,，關(guān)閉熒光光源和顯微鏡的電源,。將培養(yǎng)器皿從載物臺上取下，按照實驗室的廢棄物處理規(guī)定進行處置,。

清潔顯微鏡的載物臺,、物鏡、目鏡等部件,，去除可能殘留的細(xì)胞培養(yǎng)基或其他污染物,。將顯微鏡恢復(fù)到初始狀態(tài)，妥善保管,，定期進行維護和校準(zhǔn),，以確保其性能的穩(wěn)定性和觀察的準(zhǔn)確性。