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      EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）是上皮生長因子（EGF）細(xì)胞增殖和信號 傳導(dǎo)的受體,，EGFR 是一種糖蛋白,，屬于激酶型受體,，位于細(xì)胞膜表面,，靠與配體 結(jié)合來激活,。EGFR 與腫瘤細(xì)胞的增殖,、血管生成,、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡的抑制有 關(guān),。EGFR 基因突變是預(yù)測 NSCLC 患者使用 EGFR-TKIs 療效的重要靶標(biāo),。

      EGFR 激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在 18-21 外顯子，其中 19 號和 21 號外顯子突 變覆蓋突變的 90%,。EGFR 突變主要包括 4 種類型：外顯子 19 缺失突變,、外顯子 21 點突 變、外顯子 18 點突變和外顯子 20 插入突變,。最常見的 EGFR 突變?yōu)橥怙@子 19 缺失突變 和外顯子 21 點突變,，二者均會導(dǎo)致激酶結(jié)構(gòu)域活化。EGFR 基因突變可以分為兩大 類,，一個是藥物敏感突變,，也就是突變后可以使用某種靶向藥物（如 19 缺失，L858R 突 變）,，另一個是耐藥突變,，即突變后對某種靶向藥物耐藥（如 T790M 突變）。

      BaF3（小鼠原 B 細(xì)胞）的生長和增殖需要 IL-3 的維持。通過引入各種表達(dá)激酶的基因,， 能作為 BaF3 的驅(qū)動基因,，讓 BaF3 不再依賴 IL-3 而增殖，進而激酶基因成為 BaF3 增殖依 賴的驅(qū)動基因,，用于評估小分子藥物對激酶的靶向抑制作用,，原理及流程見下圖所示。
 

Figure 1. EGFR[H773_V774insH] BaF3 細(xì)胞的構(gòu)建原理圖

1. WB of EGFR H773_V774insH/BaF3

Figure 2. WB of EGFR H773_V774insH/BaF3
 

2. Sanger of EGFR H773_V774insH/BaF3

Figure 3. Sanger of EGFR H773_V774insH/BaF3


3.Anti-proliferation assay

Figure 4. CTG Proliferation Assay of EGFR[H773_V774insH] BaF3(C18).