ATCC細(xì)胞培養(yǎng)所使用的器皿必須干凈,,所以在ATCC細(xì)胞培養(yǎng)工作中,器械的清洗是十分重要的,,也是起關(guān)鍵性作用的工作,它直接影響到ATCC細(xì)胞培養(yǎng)的成敗,。
?。?)新玻璃器皿的清洗步驟:先用自來水或肥皂水刷洗干凈,,放入洗液中過夜或浸泡幾天,取出用自來水沖洗8至10次,。然后,,用蒸餾水洗3次,用去離子水(或三蒸餾水)洗2-3次,,烤干,、包裝、滅菌,。
?。?)橡皮制品的清洗步驟:一般選用白皮橡皮塞,使用前先用自來水洗涮干凈,,以后用2%NaOH煮20分鐘,,用自來水沖洗5-6次,再用1.3%HCl煮30分鐘,,用自來水沖洗5-6次,,用蒸餾水洗3次,zui后用去離子水洗,,干后包裝滅菌,。
ATCC細(xì)胞計(jì)數(shù)一般用血球計(jì)數(shù)板,按白血球計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù),。
操作方法如下:
1.首先取待稀釋的ATCC細(xì)胞懸液1ml加4ml生理鹽水(或Hank液)作5倍稀釋,。
2.先將特制的蓋玻片放在血球計(jì)數(shù)板上,使兩側(cè)均現(xiàn)帶色牛頓環(huán),。用血色素吸管(或ATCC細(xì)胞管)取少量待測ATCC細(xì)胞懸液,,沿蓋玻片邊緩緩滴入,讓其自由滲入,,待整個蓋玻片下均充滿ATCC細(xì)胞懸液為宜,。注意不要使液體流到旁邊的凹槽中。
3.在顯微鏡下,,用10′10的倍數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù),,所用計(jì)數(shù)板如圖2所示。
4.計(jì)數(shù)的方法:計(jì)算計(jì)數(shù)板的四角大方格(每個大方格又分16個小方格)內(nèi)的ATCC細(xì)胞數(shù),。計(jì)數(shù)時,,只計(jì)數(shù)完整的ATCC細(xì)胞,若聚成一團(tuán)的ATCC細(xì)胞則按一個ATCC細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),。在一個方格中,如果有ATCC細(xì)胞位于線上,,一般計(jì)上線ATCC細(xì)胞不計(jì)下線ATCC細(xì)胞,,計(jì)左線ATCC細(xì)胞不計(jì)右線ATCC細(xì)胞,,計(jì)數(shù)誤差不能超過±5%。
5.計(jì)數(shù)的換算:計(jì)完數(shù)后,,需換算出每毫升懸液中的ATCC細(xì)胞數(shù),。由于計(jì)數(shù)板中的每體積即為0.0001cm2。故可按下式計(jì)算
原ATCC細(xì)胞懸液ATCC細(xì)胞數(shù)/ml=n/4′10000′5(稀釋倍數(shù))
n=四大格內(nèi)的ATCC細(xì)胞總數(shù)
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