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【色譜實驗室】技巧總結(jié)
常說的過柱子應(yīng)該叫柱層析分離,， 也叫柱色譜。 我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱,。由于柱分的經(jīng)驗成分太多,，就關(guān)于色譜柱的使用，小編搜集了一下資料,，希望對您能有所幫助,。
柱子可以分為：加壓，常壓,，減壓,。
壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產(chǎn)品收集的時間,，但是會減低柱子的塔板數(shù),。所以其他條件相同的時候,，常壓柱是效率zui高的，但是時間也zui長,，比如天然化合物的分離,，一個柱子幾個月也是有的。
減壓柱能夠減少硅膠的使用量,， 感覺能夠節(jié)省一半甚至更多,， 但是由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā)（有時在柱子外面有水汽凝結(jié)） ，以及有些比較易分解的東西可能得不到,，而且還必須同時使用水泵抽氣（很大的噪音,，而且時間長） 。以前曾經(jīng)大量的過減壓柱,，對它有比較深厚的感情,，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒動過減壓的念頭了,。
加壓柱是一種比較好的方法,，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些,。壓力的提供可以是壓縮空氣,，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行） 。特別是在容易分解的樣品的分離中適用,。壓力不可過大,，不然溶劑走的太快就會減低分離效果。個人覺得加壓柱在普通的有機化合物的分離中是比較適用的,。
關(guān)于柱子的尺寸,，應(yīng)該是粗長的。
柱子長了,，相應(yīng)的塔板數(shù)就高,。柱子粗了，上樣后樣品的原點就?。ǚ从吃谥由暇褪菢悠?/span>層比較?。?，這樣相對的減小了分離的難度,。試想如果柱子十厘米,，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知,，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了,。而如果樣品層只有 0.5 厘米，那么各組分就比較容易得到*分離了,。當然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了,，不過這些成本相對于產(chǎn)品來說也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說,，不過溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費） 。
現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在 1：5~10,，書中寫硅膠量是樣品量的 30～40 倍,，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開（是指在所需組分 rf 在 0.2～0.4,，雜質(zhì)相差0.1 以上） ,，就可以少用硅膠，用小柱子（例如 200 毫克的樣品,，用 50px×500px 的柱子） ,；如果相差不到 0.1，就要加大柱子,，我覺得可以增加柱子的直徑,，比如用 75px 的，也可以減小淋洗劑的極性等等關(guān)于無水無氧柱,，適用于對氧,，水敏感，易分解的產(chǎn)品,。
可以濕柱,，也可以干柱。不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次,，因為溶劑和硅膠飽和時放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解,，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過,。也是因為分離的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的,，遵循 schlenk 操作,。至于是加壓、常壓,、減壓,，隨需而定。因為是 schlenk 操作,，所以點板是個問題,，如果樣品是顯色的，恭喜了,，不用點板,，直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無色,，只好準備幾十個 schlenk 瓶,，一瓶一瓶的點,，不過幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了,。像我以前過一根無水無氧柱,，
需要六個 schlenk，現(xiàn)在只一個就能把所要的全收集到,。無水無氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相,。 因為硅膠中有大量的羥基裸露在外， 很容易是樣品分解,，特別是金屬有機化合物和含磷化合物,。而氧化鋁可以做成堿性、中性和酸性
的,，選擇余地比較大,，但是比硅膠要貴些。
聽說有個方法,，就是用石英做柱子,，然后用 HF254 做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了,，沒有驗證過,。哪位做過可以提出來大家參詳參詳。
關(guān)于濕法,、干法上樣,。
濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品,，也可以用二氯甲烷,、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好,，不然溶劑就成了淋洗劑了,。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒關(guān)系,?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會析出，這一般都是比較大量的樣品才會出現(xiàn),，是因為硅膠對樣品的吸附飽和,，而樣品本身又是比較好的固體才會發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶,，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分,，如果不能重結(jié)晶那就不管它了，直接過就是了,，樣品隨著淋洗劑流動會溶解的,。
有些樣品溶解性差,，能溶解的溶劑又不能上柱（比如 DMF,DMSO 等，會隨著溶劑一起走,，顯色是一個很長的脫尾） ,，這時就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說法是 1：1,，我覺得是越少越好,，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上） ,。
溶劑的選擇,。
當然是*，zui安全,，zui環(huán)保的了,。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯,。文獻中有寫用正己烷的,，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的,，流的比淋洗劑還快,，不過因為極性很小， 有時還是非它不可,。 乙MI也可以用,， 但是就是容易睡覺， 注意保持清醒別讓溶劑流干了,，
那樣柱子也就不爽了,。二氯甲烷也有用的，但是要知道,，它和硅膠的吸附是一個放熱過程,，所以夏天的時候經(jīng)常會在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時候會好一些,。甲醇，據(jù)說能溶解部分的硅膠,，所以產(chǎn)品如果想過元素分析的話要留神,，應(yīng)該經(jīng)過后繼處理，比如說重結(jié)晶等,。其
他的溶劑用的相對較少,，要依個人的不同需要選擇了。
由于某些原因,，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛） ,，我們這里是用 10 升或 25 升的塑料桶裝的,， 就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。 經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色的雜質(zhì),，其他的雜質(zhì)就可想而知了,， 所以在比較嚴格的柱分時就要對溶劑重蒸。 當然過原料時就可以免去這一步了,，反正下面還有提純的方法,。
另外溶劑在過柱子后也回收使用，一方面環(huán)保,，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費,，缺點是要消耗一定的人工。這里要注意的是,，一般在過柱同時進行的是減壓旋蒸,，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會導性的變化， 一般會使得極性變大,， 在梯度淋洗時比較合適,，正好極性越來越大了。在過完柱子后,，溶劑zui后回收要采用常壓,，因為在減壓旋蒸時會有部分低沸點的雜質(zhì)一起出來， 常壓時就會減少這種現(xiàn)象,， 如果雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了,。
關(guān)于操作問題：
1 裝柱。
柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑,，會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的,，可以采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別,，只要能把柱子裝實就行,。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢） ，一定要均勻（不然樣品就會從一側(cè)斜著下來） ,。書中寫的都是不能見到氣泡,，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就全下來了,。當然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習了,。 但是柱子更忌諱的是開裂， 甭管豎的還是橫的,，都會影響分離效果,，甚至作廢！
2 加樣。
用少量的溶劑溶樣品加樣,，加完后將下面的活塞打開,，待溶劑層下降至石英砂面時，再加少量的低極性溶劑,，然后再打開活塞,，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了,。加入淋洗劑,，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～100px 就夠了） ,，再加壓,，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。
3 淋洗劑的選擇,。
感覺上要使所需點在 Rf0.2~0.3 左右的比較好,。不要認為在板上爬高了分的比較開，過柱子就用那種極性,，如果 Rf 在 0.6,，即使相差 0.2 也不容易在柱子上分開，因為柱子是一個多次爬板的狀態(tài),，可以通過公式的比較：0.6/0.8 一次的分離度,，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。
4 樣品的收集,。
用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡,。 所以如果樣品與硅膠的吸附比較強的話，就不容易流出,。這樣就會發(fā)生,，后面的點先出，而前面的點后出,。這時可以采用氧化鋁作固定相,。
另外，收集的試管大小要以樣品量而定,，特別是小量樣品,，如果用大試管，可能一根就收到
了三個樣品,。嗚嗚,，如果都用小試管那工作量又太大。
5 zui后的處理,。
柱分后的產(chǎn)品， 由于使用了大量的溶劑,， 其中的雜質(zhì)也會累積到產(chǎn)品中,， 所以如果想送分析,，用少量的溶劑洗滌一下，因為大部分的雜質(zhì)是溶在溶劑里的,，一洗基本就沒了,，必要時進行重結(jié)晶
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