兔子膠原酶II試劑盒
兔子膠原酶II試劑盒必須為液體,不含沉淀,。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標(biāo)本量收集體積=100ul×檢測種類,。
培養(yǎng)基 :"*培養(yǎng)基有售,,用我們拜力生物的*培養(yǎng)基,細(xì)胞培養(yǎng)更省心,!"
供應(yīng)商 :拜力生物
貨期 :7-10天
1. 試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染,。
2. 加樣:加樣或加試劑時,,請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時,,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,,將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣,。
3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),,試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,,以避免液體蒸發(fā),;洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度,。
4. 洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,,避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù),。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,,不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,,一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差,;請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,,每隔10分鐘),,如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),,避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù),。
7. 底物:底物請避光保存,,在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,,以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,,計算時請后乘以稀釋倍數(shù),。
要產(chǎn)品包括限制性內(nèi)切酶,聚合酶,,修飾酶,,各種載體, Marker ,, 引物,,測序,基因突變系統(tǒng),,噬菌體呈現(xiàn),,蛋白質(zhì)工具(蛋白激酶,磷酸酶,,糖生物學(xué),,蛋白酶)。該公司產(chǎn)品線主要分為以下九大方面:①限制性內(nèi)切酶,;②聚合酶與擴(kuò)增技術(shù),;③DNA修飾酶與克隆技術(shù);④核酸,;⑤RNAi與RNA酶,;⑥基因表達(dá)和蛋白純化技術(shù);⑦感受態(tài)細(xì)胞,;⑧蛋白質(zhì)工具,;⑨表觀遺傳學(xué)。
◇ 液體類標(biāo)本
標(biāo)本必須為液體,,不含沉淀,。包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿,。每個標(biāo)本量收集體積=100ul×檢測種類。
◇ 血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。收集上清,。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
◇ 血漿:
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
◇ 尿液、胸腹水,、腦脊液:
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
◇ 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
在生物制品方面,我公司是世界衛(wèi)生組織下屬生物標(biāo)準(zhǔn)品實驗室(英國生物制品檢定所NIBSC和荷蘭VQC),、歐洲藥品質(zhì)量監(jiān)察會(EDQM)在中國的進(jìn)口商,,同時我部門也在代理進(jìn)口一些其他菌種保藏機(jī)構(gòu)的產(chǎn)品,比如德國國家菌種保藏中心(DSMZ),、英國國立標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏中心(NCTC)等,,為國內(nèi)科研以及生產(chǎn)用戶提供細(xì)胞株,、菌株等生物標(biāo)準(zhǔn)品。
收到后,,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,。
(一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),,嚴(yán)格無菌操作,,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,,僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng),。
(二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次,。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,,細(xì)胞隨即脫落下來,。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,,分到新的培養(yǎng)瓶中,。一傳二。
注意:傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,,一半用你們的,,以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。
無菌操作注意事項:
1)操作前要洗手,,進(jìn)入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試,。試劑等瓶口也要擦試。
2)點燃酒精燈,,操作在火焰附近進(jìn)行,,耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼,金屬器械燒灼時間不能太長,,以免退火,,并冷卻后才能夾取組織,,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,,以免燒焦形成碳膜,。
3)操作動作要準(zhǔn)確敏捷,但又不能太快,,以防空氣流動,,增加污染機(jī)會。
4)不能用手觸已消毒器皿的工作部分,,工作臺面上用品要布局合理,。
5)瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。
6)吸溶液的吸管等不能混用,。
標(biāo)準(zhǔn)蛋白表達(dá)服務(wù)
1. 克隆目標(biāo)蛋白編碼序列到合適的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上;
2. 制備重組bacmid DNA,;
3. bacmid DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞,,制備P1和P2病毒stock;
4. P2病毒滴度測定
5. 重組蛋白表達(dá)評估和條件優(yōu)化,;
6. 小規(guī)模蛋白表達(dá)和純化(500 ml培養(yǎng)物),;
7. 大規(guī)模蛋白表達(dá)和純化(可選)。
病毒制備服務(wù)
1. 克隆目標(biāo)蛋白編碼序列到合適的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上,;
2. 制備重組bacmid DNA,;
3. bacmid DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞,制備P1和P2病毒stock,;
4. P2病毒滴度測定(滴度108-109),;
5. 蛋白表達(dá)驗證;
6. P3病毒制備(可制備3L重組桿狀病毒),。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存,。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
儀器(Instruments),、細(xì)胞融合,、轉(zhuǎn)染、培養(yǎng)(Cell Fusion, Transfection, Culture),、體外翻譯(In vitro Translation),、抗體(Antibodies)、檢測試劑盒(ELISA & Detection Kits ELISA),、生物醫(yī)學(xué)相關(guān)(Biomedical),、蛋白質(zhì)、多肽&糖類(Proteins, Peptides & Sugars),、化學(xué)試劑(Chemicals),、分子生物(DNA Molecular Biology)
現(xiàn)在一般完整的試劑盒應(yīng)該有一下幾個組成:
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物),;
(3)酶的底物,;
(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中),;
(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液,;
(6)洗滌液,在板式ELISA中,,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水,;
(7)酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,,其濃度按加量及比色液的體積而異,,在板式ELISA中一般采用3mol/L。