產(chǎn)品名稱:DMS 153(人小細胞肺癌)

貨號 :SX-C0146

培養(yǎng)基 :"*培養(yǎng)基有售,用我們拜力生物的*培養(yǎng)基,，細胞培養(yǎng)更省心！"

規(guī)格 :5×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

供應商 :拜力生物

貨期 :7-10天

DMS 153(人小細胞肺癌)實驗事項：

1.  試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫,，使用后請立即按照說明書要求保存試劑,。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,，避免交叉污染。

2.   加樣：加樣或加試劑時,，請注意在吸取標本 / 標準品,，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,，將會導致不同的“預孵育"時間,，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,，如標本數(shù)量多,，推薦使用多道移液器加樣。

3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā),，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā),；洗板后應盡快進行下步操作,，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。

4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù),。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品,、檢測溶液A工作液,、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制,，不能混淆,。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,，一次不要小于10μl),，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品,、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液,。

6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘),，如顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。

7.  底物：底物請避光保存,，在儲存和溫育時避免強光直接照射,。

建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性,。

如標本中待測物質含量過高,，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù),。

洗板方法

1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次,；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要,，重復此過程數(shù)次,。

2.  自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。

計算

以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標),，OD值為橫坐標(對數(shù)坐標)，在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。

◇      注意事項：

收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復凍融,。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月,。-70度可保存6個月,。部分標本需添加抑tai酶。

◇      液體類標本

標本必須為液體，不含沉淀,。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類,。

◇      血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清,。如有沉淀形成,，應再次離心。

◇      血漿：

應根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。如有沉淀形成，應再次離心,。

◇      尿液,、胸腹水、腦脊液：

用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。如有沉淀形成,，應再次離心,。

◇      細胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。

◇      組織標本：

切割標本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin。用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。