產(chǎn)品名稱:BGC-823(人胃腺癌細(xì)胞(低分化))

貨號(hào) :SX-C0077

培養(yǎng)基 :"*培養(yǎng)基有售,用我們拜力生物的*培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)更省心,！"

規(guī)格 :5×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

供應(yīng)商 :拜力生物

貨期 :7-10天

BGC-823(人胃腺癌細(xì)胞(低分化))實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,，避免交叉污染,。

2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,，酶結(jié)合物或底物時(shí),，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間,，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用多道移液器加樣,。

3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度,。

4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差,；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),，OD值為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),，在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析,，如curve expert 1.3,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。

◇      注意事項(xiàng)：

收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定,。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融,。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),，-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月,。部分標(biāo)本需添加抑tai酶,。

◇      液體類標(biāo)本

標(biāo)本必須為液體，不含沉淀,。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿,。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類。

◇      血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

◇      組織標(biāo)本：

切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin,。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存,，如有必要，可以將樣品濃縮干燥,。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用。