腫瘤壞死因子αⅠ型受體ELISA KIT

腫瘤壞死因子αⅠ型受體ELISA KIT必須為液體,，不含沉淀。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類,。

培養(yǎng)基 :"*培養(yǎng)基有售，用我們拜力生物的*培養(yǎng)基,，細(xì)胞培養(yǎng)更省心,！"

供應(yīng)商 :拜力生物

貨期 :7-10天

1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑,。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,，避免交叉污染,。

2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用多道移液器加樣。

3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā),，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。

4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù),。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液,、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),，一次不要小于10μl),，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液,。

6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘),，如顏色較深,，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。

7.  底物：底物請(qǐng)避光保存,，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù),。

要產(chǎn)品包括限制性內(nèi)切酶，聚合酶,，修飾酶，各種載體， Marker ,， 引物，測(cè)序,，基因突變系統(tǒng),，噬菌體呈現(xiàn),，蛋白質(zhì)工具（蛋白激酶，磷酸酶,，糖生物學(xué)，蛋白酶）,。該公司產(chǎn)品線主要分為以下九大方面：①限制性內(nèi)切酶；②聚合酶與擴(kuò)增技術(shù),；③DNA修飾酶與克隆技術(shù)；④核酸,；⑤RNAi與RNA酶,；⑥基因表達(dá)和蛋白純化技術(shù),；⑦感受態(tài)細(xì)胞；⑧蛋白質(zhì)工具,；⑨表觀遺傳學(xué)。

◇      液體類標(biāo)本

標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿,。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類。

◇      血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

◇      血漿：

應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

◇      尿液、胸腹水,、腦脊液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

在生物制品方面,，我公司是世界衛(wèi)生組織下屬生物標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)驗(yàn)室（英國生物制品檢定所NIBSC和荷蘭VQC）、歐洲藥品質(zhì)量監(jiān)察會(huì)（EDQM）在中國的進(jìn)口商,，同時(shí)我部門也在代理進(jìn)口一些其他菌種保藏機(jī)構(gòu)的產(chǎn)品，比如德國國家菌種保藏中心(DSMZ),、英國國立標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏中心(NCTC)等,，為國內(nèi)科研以及生產(chǎn)用戶提供細(xì)胞株,、菌株等生物標(biāo)準(zhǔn)品,。
收到后,，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,。
（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，吸出培養(yǎng)液,，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng),。
(二)如果細(xì)胞已長滿,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液,，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次,。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,，細(xì)胞隨即脫落下來,。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,，吸出,，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二,。
注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的,，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。

注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
標(biāo)準(zhǔn)蛋白表達(dá)服務(wù)
1. 克隆目標(biāo)蛋白編碼序列到合適的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上；
2. 制備重組bacmid DNA,；
3. bacmid DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，制備P1和P2病毒stock,；
4. P2病毒滴度測(cè)定
5. 重組蛋白表達(dá)評(píng)估和條件優(yōu)化,；
6. 小規(guī)模蛋白表達(dá)和純化（500 ml培養(yǎng)物）,；
7. 大規(guī)模蛋白表達(dá)和純化（可選）,。
病毒制備服務(wù)
1. 克隆目標(biāo)蛋白編碼序列到合適的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上,；
2. 制備重組bacmid DNA；
3. bacmid DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞,，制備P1和P2病毒stock；
4. P2病毒滴度測(cè)定（滴度108－109）,；
5. 蛋白表達(dá)驗(yàn)證,；
6. P3病毒制備（可制備3L重組桿狀病毒）。