關(guān)鍵詞:免疫熒光(IF)技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌免疫熒光(IF)技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
免疫熒光(IF)技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：免疫熒光(IF)技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)   
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫熒光技術(shù)是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù),。它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,，先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）,。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位，以及利用定量技術(shù)（比如流式細胞儀）測定含量,。
細胞準備
用于免疫熒光實驗的細胞可以是直接生長在蓋玻片上的貼壁細胞,，也可以是經(jīng)過離心后涂片的懸浮細胞或者是將取自體內(nèi)的組織細胞懸液離心后涂片。貼壁良好的細胞一般在培養(yǎng)時直接放入coverslips讓細胞生長在其上即可,，盡量避免使用貼壁性能不好的細胞進行免疫熒光實驗,，以免后續(xù)的漂洗操作引起細胞脫落。少數(shù)實驗需要使用這類細胞或者懸浮細胞進行免疫熒光觀察,，建議使用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片,。
基本實驗步驟：
（1）細胞準備：對單層生長細胞，在傳代培養(yǎng)時,，將細胞接種到預(yù)先放置有處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中,，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次,；對懸浮生長細胞,，取對數(shù)生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次,，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片,。
（2）固定：根據(jù)需要選擇適當?shù)墓潭▌┕潭毎９潭ㄍ戤吅蟮募毎芍糜诤B氮納的PBS中4℃保存3個月,。PBS洗滌3×5 min.
（3）通透：使用交聯(lián)劑（如多聚甲醛）固定后的細胞,，一般需要在加入抗體孵育前，對細胞進行通透處理,，以保證抗體能夠到達抗原部位,。選擇通透劑應(yīng)充分考慮抗原蛋白的性質(zhì)。通透的時間一般在5-15min.通透后用PBS洗滌3×5 min.
（4）封閉：使用封閉液對細胞進行封閉，時間一般為30min.
（5）一抗結(jié)合：室溫孵育1h或者4℃,。PBST漂洗3次,，每次沖洗5min.
（6）二抗結(jié)合：間接免疫熒光需要使用二抗。室溫避光孵育1h.PBST漂洗3次,，每次沖洗5min后,，再用蒸餾水漂洗一次。
（7）封片及檢測：滴加封片劑一滴,，封片,，熒光顯微鏡檢查。
注意事項：
1,、染完之后沒有封片前直接照一些,，因為有的時候可能封片會出現(xiàn)問題，再想照反而沒有了,，另外不要拖太長時間,，熒光會崔滅的。
2,、熒光的片子一定要避光保存,，保存的好的話，過一段時間仍然能照出很好的片子,。
3,、二抗用之前一定離心，不然有的時候有那種沉淀,，在片子上就是一個很大的非特異性熒光光點,，非常難看。
4,、整個操作在4℃下進行,，洗滌液中加有比常規(guī)防腐劑量高10倍的NaN３，上述實驗條件是防止一抗結(jié)合細胞膜抗原后發(fā)生交聯(lián),、脫落,。
5、洗滌要充分,，以避免游離抗體封閉二抗與細胞膜上一抗相結(jié)合,，出現(xiàn)假陰性。
6,、加適量正常兔血清可封閉某些細胞表面免疫球蛋白Fc受體,，降低和防止非特異性染色。
7,、細胞活性要好,，否則易發(fā)生非特異性熒光染色,。抗淬滅劑可拿來直接封片,20微升即可,，之后片子可保留更長時間。
常見熒光素的特性：
1,、FITC：黃色結(jié)晶粉末,，吸收光：490~495nm，發(fā)射光：520~530nm,，明亮的黃綠色熒光,。
2、RB200： 橘紅色粉末, 吸收光570nm,，發(fā)射光 595~600nm,，橘紅色熒光。
3,、TRITC： 紫紅色粉末,，吸收550nm，發(fā)射光 620nm,，橙紅色熒光,。
4、鑭系：Eu,、Tb
5,、PE：吸收光490~560nm，發(fā)射光 595nm,，紅色熒光,。
6、其它：酶作用后產(chǎn)生熒光物質(zhì),。