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免疫細(xì)胞化學(xué)ICC|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

時(shí)間:2015-9-1閱讀:198

關(guān)鍵詞:免疫細(xì)胞化學(xué)ICC|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介:世界*品牌免疫細(xì)胞化學(xué)ICC|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,,質(zhì)量保證,*,。
免疫細(xì)胞化學(xué)ICC|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi),。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌:   
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry, ICC) 是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,,通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶,、金屬離子,、同位素) 顯色來(lái)確定細(xì)胞內(nèi)抗原的成分(主要是多肽和蛋白質(zhì)),對(duì)其進(jìn)行定位,、定性及定量的研究,。 
對(duì)抗原和抗體的要求 
>>具有特異性高和親和力強(qiáng)的抗體是實(shí)驗(yàn)成功的首要條件。 
-對(duì)抗體的要求:純度高,、比活性強(qiáng),;   
>>高度特異性抗體的獲得,取決于抗原的純度,。
-對(duì)抗原的要求:純度高,,免疫原性強(qiáng),穩(wěn)定無(wú)變化,。 
當(dāng)免疫組化染色沒(méi)有出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果時(shí),,應(yīng)系統(tǒng)地查找原因,,而每一次只能排除一種可能的原因,。
對(duì)照/標(biāo)本無(wú)染色
① 確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑,包括一抗,、二抗,、三抗及底物等。
② 確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入,,是否孵育了足夠的時(shí)間,。
③ 對(duì)照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體,以及所用的檢測(cè)系統(tǒng)是否和一抗匹配,,這一點(diǎn)是非常重要的,。比如,如果一抗是兔來(lái)源的抗體,,二抗一定要用抗兔的二抗來(lái)匹配,;或一抗是小鼠的IgM一抗,二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM(不是IgG)二抗,。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液,。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件,尤其是標(biāo)記了酶或熒光素的抗體,現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存,,應(yīng)避免反復(fù)凍融,,試劑保存時(shí)一定要避免與揮發(fā)性有機(jī)溶劑同放一室,以免降低抗體的效價(jià),。
⑥ 檢查標(biāo)本的儲(chǔ)存條件,,用已知陽(yáng)性的標(biāo)本來(lái)同時(shí)做陽(yáng)性對(duì)照。
⑦ 檢查色原/底物溶液,,zui簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法是將一滴標(biāo)記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中,,如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化,則可排除底物的因素,。需要注意的是,,有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)用完,否則會(huì)失效,。
⑧ 檢查沖洗液是否和反應(yīng)試劑匹配,,溶液的pH值很重要,與過(guò)氧化物酶底物匹配的溶液中不應(yīng)含有疊氮鈉,。
⑨ 檢查復(fù)染劑和封片劑是否和所使用的色原匹配,。 
弱陽(yáng)性 
如果陰性對(duì)照沒(méi)有染色而陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本弱陽(yáng)性,除了考慮上述因素外,,還應(yīng)考慮:
① 標(biāo)本的固定方式,,不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r(shí)溫度過(guò)高,都會(huì)影響到所檢測(cè)的抗原的數(shù)量和質(zhì)量,。
② 不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式,,由于石蠟切片在制作的過(guò)程中固定劑對(duì)抗原的封閉作用,必須用抗原熱修復(fù)或酶消化或兩種同時(shí)使用的抗原雙暴露法,,至于使用哪一種方法,,應(yīng)參照生產(chǎn)廠家的說(shuō)明,同時(shí)結(jié)合標(biāo)本的具體情況而定,。
③ 抗體的稀釋度是否過(guò)高或者孵育的溫度/時(shí)間是否正確,。一般試劑生產(chǎn)廠家都會(huì)對(duì)試劑給出一定的使用范圍,但是由于使用者的標(biāo)本來(lái)自各種組織,,處理過(guò)程也不盡相同,,所以應(yīng)參照使用范圍,對(duì)所使用的一抗進(jìn)行梯度測(cè)試,,找出*的使用濃度,。
④ 切片上了過(guò)多的沖洗液,當(dāng)抗體加至切片上時(shí),,等于人為地對(duì)抗體進(jìn)行了進(jìn)一步的稀釋,。
⑤ 孵育時(shí)切片是否放置水平,否則會(huì)導(dǎo)致抗體流失。 
如果陰性對(duì)照沒(méi)有反應(yīng),,陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)良好,,而標(biāo)本弱陽(yáng)性,則可能是由于陽(yáng)性對(duì)照不是同一種組織,、或固定方式不同等原因所致,。

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