關(guān)鍵詞:免疫共沉淀|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌免疫共沉淀|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
免疫共沉淀|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>各種成分在工作液中的終濃度：
* Tris-HCl: 50 mM, pH 7.4
* NP-40: 1%
* 去氧膽酸鈉：0.25%
* NaCl: 150 mM
* EDTA: 1 mM
* PMSF: 1 mM
* 抑蛋白酶肽,，亮抑酶肽,胃蛋白酶抑制劑: 各1 μg/ml
* Na3VO4: 1 mM
* NaF: 1 mM
實驗流程為：
1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養(yǎng)板上的適宜細(xì)胞。刮去每塊板上的細(xì)胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中,。
2．將每毫升細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中,，在微量離心機上4℃以zui大速度離心15 min。
3．收集上清（約30 ml）并加入30μg的適當(dāng)抗體,，4℃搖動免疫沉淀物1 h,。
4．加入0.9 ml的蛋白質(zhì)A-Sepharose 懸液，4℃搖動免疫沉淀物30 min。
5．用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物,，再重復(fù)洗5次,。zui后，用NETN洗一次,。
6．吸出混合物的液體部分,。加入800μl的1×SDS膠加樣緩沖液到球珠中，煮沸4 min,。
7．將樣品加入到大孔的不連續(xù)SDS-PAGE梯度膠中,，在10 mA的恒定電流下電泳。
8．通過考馬斯藍(lán)染色觀察蛋白質(zhì)泳帶,。
9．從膠上切下目標(biāo)帶,，將其放到微量離心管中，用1ml 50%乙腈洗兩次,，每次3 min,。
10． 用胰蛋白酶消化膠中的蛋白質(zhì)，再將肽電洗脫,。
11． 通過窄孔液相色譜分離肽,。將收集的肽在ABI 477A或494A機器上進行自動Edman降解測序。
在免疫共沉淀實驗中要保證實驗結(jié)果的真實性,，應(yīng)注意以下幾點：
(1) 確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的,，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生,；
(2) 要確?？贵w的特異性，即在不表達(dá)抗原的細(xì)胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀,；
(3) 確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細(xì)胞中,，而不是由于細(xì)胞的溶解才發(fā)生的，這需要進行蛋白質(zhì)的定位來確定,。