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關鍵詞:流式細胞術|實驗技術服務
簡介:世界*品牌流式細胞術|實驗技術服務原裝,,質量保證,*,。
流式細胞術|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
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產(chǎn)品品牌:
測序實驗流程:
PI 染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,離心,,1500rpm , 5min,,棄上清液。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次,,棄上清。
3,、加入2ml預冷的70%酒精,,4℃固定30min,,或是-20℃固定。
4,、離心,,棄上清液。
5,、用1×PBS 1ml洗滌1次,,離心。
6,、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,,37℃孵育30min,離心,。
7,、用1×PBS 1ml洗滌1次,離心,。
8,、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中,室溫避光孵育30min,。
9,、混勻,過300目篩網(wǎng),,置流式管中,, 4℃冰箱保存,待測,。
GFP PI染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,離心,,1500rpm , 5min,,棄上清液。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次,,棄上清。
3,、加入2ml預冷PFA,,PFA的濃度根據(jù)細胞的特點進行調(diào)節(jié),4℃固定30min,。
以下步驟同PI 染色操作步驟的
細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,離心,,1500rpm,,5min,棄上清液,。
2,、以冷PBA 1ml,離心洗滌,,棄上清液,。
3、加入用PBA稀釋的熒光素標記的抗體200ul,。用微量移液器輕輕吹打混勻,,4℃或置冰上孵育30min-1h。
4,、離心棄上清液,。
5、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,,以除去未結合的多余抗體成分,。
6、向細胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻,,置流式管中,,4℃避光保存,待測,。
細胞表面間接免疫熒光染色操作步驟
1-2,、同細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
3、 用PBA稀釋的*抗體200ul,,對照管加入對應于一抗的正常實驗動物IgG,,輕輕吹打混勻,4℃或置冰上孵育1.5-2h,。離心,,棄上清。
4,、 BS1ml離心洗滌1次,,以去除多余的未結合的特異性抗體。
5,、 PBA適當稀釋的熒光素標記的第二抗體200ul,。吹打混勻,4℃或置冰上孵育30min,,避光,。
6、 PBS 1ml離心洗滌2次,。
7,、將細胞重新懸浮于500ulPBS中,,混勻,置流式管中,,避光,,4℃冰箱保存,待測,。
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