關(guān)鍵詞:酵母雙(單)雜交cDNA文庫構(gòu)建服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌酵母雙(單)雜交cDNA文庫構(gòu)建服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
酵母雙(單)雜交cDNA文庫構(gòu)建服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：酵母雙(單)雜交cDNA文庫構(gòu)建服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>原理
酵母雙雜交技術(shù)產(chǎn)生以來，它主要應(yīng)用在以下幾方面：(1）檢驗一對功能已知蛋白間的相互作用,。(2）研究一對蛋白間發(fā)生相互作用所必需的結(jié)構(gòu)域,。(3)用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交cDNA文庫，以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的傳遞途徑,。(4)分析新基因的生物學(xué)功能,，即以功能未知的新基因去篩選文庫。
ProQuest系統(tǒng)依靠報告基因的轉(zhuǎn)錄激活來鑒定蛋白相互作用,。將一個基因克隆到'誘餌'載體,，pDEST32，并和GAL4蛋白的DNA結(jié)合域（DBD）表達為融合蛋白。將第二個基因或者編碼可能的相互作用子蛋白的cDNA文庫克隆到'獵物'載體,，pDEST22,，同GAL4的轉(zhuǎn)錄激活域（AD）表達為融合蛋白。當(dāng)兩個蛋白相互作用時,，AD和DBD間距離被拉近,，從而激活報告基因的表達
服務(wù)流程
1) 提取總RNA，分離mRNA,，反轉(zhuǎn)錄cDNA,。
2) 將cDNA與pDONR222載體進行BP重組反應(yīng)，重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細胞,。
3) 甘油保存大腸桿菌文庫,。
4) 提取大腸桿菌文庫質(zhì)粒DNA，制備酵母感受態(tài)細胞
5) 大腸桿菌文庫質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化酵母菌,，測定轉(zhuǎn)化效率,，
6) 收集酵母轉(zhuǎn)化子，測定文庫效價,。
7) 甘油保存酵母菌文庫,。
使用優(yōu)點： 在擁有相關(guān)組織基因文庫的情況下
1 ）    可以用來比對病變組織更快的找到突變基因或者導(dǎo)致變異的蛋白，更快的找到攻克方向,。
2 ）    可以用作大規(guī)模的蛋白篩選,，在較短時間內(nèi)對找到某些藥物對相關(guān)組織主要的作用蛋白，對于藥物的修飾和改進明確方向,。
3 ）    可以反復(fù)使用,，培養(yǎng)時間短，適合大規(guī)模篩選使用,。
4 ）    作用信號是在融合基因表達后,， 在細胞內(nèi)重建轉(zhuǎn)錄因子的作用而給出的，省去了純化蛋白質(zhì)的繁瑣步驟,。
5 ）    檢測在活細胞內(nèi)進行,， 可以在一定程度上代表細胞內(nèi)的真實情況。檢測的結(jié)果可以是基因表達產(chǎn)物的積累效應(yīng),，因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時的相互作用,。
注意事項    
1.  RNA 的提取（例如異硫氰酸胍法,，鹽酸胍—有機溶劑法,，熱酚法等等，提取方法的選擇主要根據(jù)不同的樣品而定）,。
2.  要構(gòu)建一個高質(zhì)量的 cDNA 文庫,，獲得高質(zhì)量的 mRNA 是至關(guān)重要的,，所以處理 mRNA 樣品時必須仔細小心。
3.  由于 RNA 酶存在所有的生物中,，并且能抵抗諸如煮沸這樣的物理環(huán)境,，因此建立一個無 RNA 酶的環(huán)境對于制備 RNA 很重要。
4.  文庫構(gòu)建要選擇合適的載體,，常規(guī)用的是 λ 噬菌體,，這是因為 λ DNA兩端具有由12個核苷酸的粘性末端，可用來構(gòu)建柯斯質(zhì)粒,，這種質(zhì)粒能容納大片段的外源DNA,。
5.  膠回收前電泳槽，電泳板,，梳子等都要用1%的HCl浸泡,。
6.  膠回收時電壓要穩(wěn)定。
cDNA構(gòu)建成功關(guān)鍵因素 
1.  保證獲得數(shù)量足夠的高質(zhì)量的起始RNA
2.  反轉(zhuǎn)錄成功與否及反轉(zhuǎn)錄效率是關(guān)鍵中的關(guān)鍵
3.  層析柱cDNA分級很關(guān)鍵