關(guān)鍵詞:酵母雙(單)雜交cDNA文庫構(gòu)建服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌酵母雙(單)雜交cDNA文庫構(gòu)建服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
酵母雙(單)雜交cDNA文庫構(gòu)建服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：酵母雙(單)雜交cDNA文庫構(gòu)建服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)    
測序?qū)嶒?yàn)流程：
原理
酵母雙雜交技術(shù)產(chǎn)生以來，它主要應(yīng)用在以下幾方面：(1）檢驗(yàn)一對功能已知蛋白間的相互作用,。(2）研究一對蛋白間發(fā)生相互作用所必需的結(jié)構(gòu)域,。(3)用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交cDNA文庫，以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的傳遞途徑,。(4)分析新基因的生物學(xué)功能,，即以功能未知的新基因去篩選文庫。
ProQuest系統(tǒng)依靠報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄激活來鑒定蛋白相互作用,。將一個(gè)基因克隆到'誘餌'載體,，pDEST32，并和GAL4蛋白的DNA結(jié)合域（DBD）表達(dá)為融合蛋白,。將第二個(gè)基因或者編碼可能的相互作用子蛋白的cDNA文庫克隆到'獵物'載體，pDEST22,，同GAL4的轉(zhuǎn)錄激活域（AD）表達(dá)為融合蛋白,。當(dāng)兩個(gè)蛋白相互作用時(shí)，AD和DBD間距離被拉近,，從而激活報(bào)告基因的表達(dá)
服務(wù)流程
1) 提取總RNA,，分離mRNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA,。
2) 將cDNA與pDONR222載體進(jìn)行BP重組反應(yīng),，重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞。
3) 甘油保存大腸桿菌文庫,。
4) 提取大腸桿菌文庫質(zhì)粒DNA,，制備酵母感受態(tài)細(xì)胞
5) 大腸桿菌文庫質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化酵母菌，測定轉(zhuǎn)化效率,，
6) 收集酵母轉(zhuǎn)化子,，測定文庫效價(jià)。
7) 甘油保存酵母菌文庫,。
使用優(yōu)點(diǎn)： 在擁有相關(guān)組織基因文庫的情況下
1 ）    可以用來比對病變組織更快的找到突變基因或者導(dǎo)致變異的蛋白,，更快的找到攻克方向。
2 ）    可以用作大規(guī)模的蛋白篩選,，在較短時(shí)間內(nèi)對找到某些藥物對相關(guān)組織主要的作用蛋白,，對于藥物的修飾和改進(jìn)明確方向,。
3 ）    可以反復(fù)使用，培養(yǎng)時(shí)間短,，適合大規(guī)模篩選使用,。
4 ）    作用信號是在融合基因表達(dá)后， 在細(xì)胞內(nèi)重建轉(zhuǎn)錄因子的作用而給出的,，省去了純化蛋白質(zhì)的繁瑣步驟,。
5 ）    檢測在活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行， 可以在一定程度上代表細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)情況,。檢測的結(jié)果可以是基因表達(dá)產(chǎn)物的積累效應(yīng),，因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用。
注意事項(xiàng)    
1.  RNA 的提?。ɡ绠惲蚯杷犭曳?，鹽酸胍—有機(jī)溶劑法，熱酚法等等,，提取方法的選擇主要根據(jù)不同的樣品而定）,。
2.  要構(gòu)建一個(gè)高質(zhì)量的 cDNA 文庫，獲得高質(zhì)量的 mRNA 是至關(guān)重要的,，所以處理 mRNA 樣品時(shí)必須仔細(xì)小心,。
3.  由于 RNA 酶存在所有的生物中，并且能抵抗諸如煮沸這樣的物理環(huán)境,，因此建立一個(gè)無 RNA 酶的環(huán)境對于制備 RNA 很重要,。
4.  文庫構(gòu)建要選擇合適的載體，常規(guī)用的是 λ 噬菌體,，這是因?yàn)?λ DNA兩端具有由12個(gè)核苷酸的粘性末端,，可用來構(gòu)建柯斯質(zhì)粒，這種質(zhì)粒能容納大片段的外源DNA,。
5.  膠回收前電泳槽,，電泳板，梳子等都要用1%的HCl浸泡,。
6.  膠回收時(shí)電壓要穩(wěn)定,。
cDNA構(gòu)建成功關(guān)鍵因素 
1.  保證獲得數(shù)量足夠的高質(zhì)量的起始RNA
2.  反轉(zhuǎn)錄成功與否及反轉(zhuǎn)錄效率是關(guān)鍵中的關(guān)鍵
3.  層析柱cDNA分級很關(guān)鍵