關(guān)鍵詞:基因組文庫(kù)(Genomic Library)構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌基因組文庫(kù)(Genomic Library)構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*,。
基因組文庫(kù)(Genomic Library)構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：基因組文庫(kù)(Genomic Library)構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
基因組DNA文庫(kù)包括了基因組所有順序的隨機(jī)克隆片段,。一個(gè)好的基因組DNA文庫(kù)的大小應(yīng)足夠大,，以便包括所有的基因DNA順序。DNA克隆片段也應(yīng)足夠大,，其中包括整個(gè)基因,、連接基因及它們穩(wěn)定形式所要的側(cè)翼順序。為了獲得高的克隆效率和較大的插入片段,，λ噬菌體載體和質(zhì)粒經(jīng)常被使用構(gòu)建基因組DNA文庫(kù),。λ噬菌體文庫(kù)易于操作，噬菌體載體上有多克隆位點(diǎn),。λ噬菌體能容納10-50kb插入DNA,，載體類型應(yīng)根據(jù)所要基因組DNA的大小和用途來(lái)選擇。
構(gòu)建一個(gè)基因組DNA文庫(kù)的基本步驟：
①分離純化基因組DNA；
②切割DNA成合適大小的片段以用于克??；
③載體DNA的制備；
④把基因組DNA段和載DNA連接,；
⑤包裝重組分子,；
⑥測(cè)定入噬菌體滴度；
⑦擴(kuò)增DNA文庫(kù),；
⑧評(píng)估文的質(zhì)量,。
基因組文庫(kù)構(gòu)建步驟：1、載體： 
l噬菌體：48.5kb,插入型(zui多可容納9kb),、取代型(可容納 38-51kb,，zui適19-20kb)， EMBL, Charon 粘性質(zhì)粒(Cosmid)：4-6kb, 質(zhì)粒+噬菌體的性質(zhì),，可容納大片段的外源基因,，zui多可容納46kb。 酵母人工染色體克隆體系（YAC,，Yeast Artificial Chromosome  Cloning System） 插入大小200—1000kb 2,、 載體DNA的制備： 高分子量的外源DNA 100-150kb載體DNA酶切反應(yīng)-----載體臂的純化-----載體脫磷處理 www.cqwestern。,。ｃｏｍ（常用BamHI）   （蔗糖密度梯度離心）  （堿性磷酸酶） 3,、連接和包裝：外源片段與兩臂之間的比例，包裝蛋白 4,、感染宿主菌：選擇合適的宿主菌,，LE392, NM538, NM539, KW251等 5、基因組文庫(kù)的保存和擴(kuò)增： 6,、測(cè)滴度,，要在106fu以上
7、保存：氯仿4℃,，7% DMSO -70℃
需要注意：
(1)電泳時(shí),，要選用合適的DNA Ladder，以保證電泳后可以準(zhǔn)確定位所需分子量的DNA,。
(2)電泳以后,，應(yīng)盡量縮短用紫外光照射目標(biāo)DNA的時(shí)間，否則會(huì)顯著降低克隆效率,。
(3)回收DNA的時(shí)候,，應(yīng)該要避免過(guò)度離心，以防止DNA被剪切,，降低文庫(kù)質(zhì)量,。
方法
1,。將50μl BAC轉(zhuǎn)化菌的培養(yǎng)物接種到500ml含12。5μg/ml氯霉素的LB液體培養(yǎng)基中,，37℃ 震蕩(280rpm)培養(yǎng)12到16小時(shí),。
2。2500g,，4℃,，離心15min，收集菌體,。
3,。用100ml冰預(yù)冷的STE重新懸浮細(xì)菌沉淀。按步驟2方法離心收集細(xì)菌,。
4。用24ml含RNase(100μg/ml)的堿性裂解液I溶解細(xì)菌,。加溶菌酶至終濃度為1mg/ml,。
5。加入24ml新鮮配置的堿性裂解液II,。蓋緊離心瓶蓋,，輕輕翻轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次，使內(nèi)容物*混勻,，冰裕5min,。
6。加入24ml冰預(yù)冷的堿性裂解液III,，蓋緊瓶蓋,，輕輕翻轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次，使內(nèi)容物*混勻,，置冰上5min,。
7。15000g,，4℃,，離心10min，將上清轉(zhuǎn)移到另一離心瓶中,，棄沉淀,。
8。加等體積的酚：氯仿,。輕輕翻轉(zhuǎn)離心瓶數(shù)次,，混勻。3000g,，室溫離心15min,。
9。將水相移至另一離心瓶中，加入等體積的異丙醇,，翻轉(zhuǎn)離心瓶數(shù)次,，混勻。
10,。15,，000g，室溫離心15分鐘,，回收核酸沉淀,。
11。棄上清,，用20ml 70%乙醇漂洗沉淀,。
12。棄乙醇,，風(fēng)干使乙醇揮發(fā)殆盡,。
13。小心將BAC DNA沉淀溶于0,。2ml TE (pH8,。0) 中。