關鍵詞:滑膜細胞原代培養(yǎng)技術服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌滑膜細胞原代培養(yǎng)技術服務|實驗技術服務原裝,，質量保證,*,。
滑膜細胞原代培養(yǎng)技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數據真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果,。
產品品牌：   http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
方法
1.   將切下的組織在手術臺上請將標本放入低溫生理鹽水中(靜止),，在手術完成時將標本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。
2.  在超凈臺中將標本放入培養(yǎng)皿中,，加入α-MEM洗滌,。
3.  獲得組織切開，仔細辨認于關節(jié)反折處及增生的白色光滑的滑膜組織,，附于關節(jié)軟骨面的增生的血管翳也為滑膜組織(可作另一管消化),，仔細剔除脂肪組織，用α-MEM洗二次(以去除紅細胞),，放在小青瓶中用解剖剪銳性切碎,。
4.   用雙倍獲得組織的體積含有4 mg/mlⅠ型膠原酶的α-MEM消化37℃孵育120分鐘(在此期間震動混勻數次)
5.   30分鐘后收集*管細胞：細胞懸液經70 μm細胞濾網過濾，用1500-2000轉離心6分鐘,，上清為Ⅰ型膠原酶加入未過濾網的組織,，繼續(xù)用于消化。
6.   離心管底細胞用α-MEM離心洗滌2次,，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000轉,，離心6分鐘，zui后一次用記數板觀察到有細胞,。細胞zui終懸浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中,，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
7.  60鐘后收集第二管細胞：細胞懸液經70 μm細胞濾網過濾,，用1500-2000 rpm離心6分鐘,；用α-MEM洗2次，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000 rpm離心6分鐘，zui后一次用記數板觀察細胞并計數,。細胞zui終懸浮于α-MEM含有10%胎牛血清中,，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
8.   必要時可做第三管細胞收集,；并立即作原代滑膜細胞培養(yǎng),。
9.  每2-3天換液一次。
實驗材料：
1. 實驗動物：大鼠,、兔,，人手術切除的關節(jié)等；
2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg 2+ 的1×PBS,，添加100IU/ml青霉素,、100μg/ml鏈霉素，pH7.2,；
3. 培養(yǎng)液：RPMI1640培養(yǎng)基,，補加15%小牛血清；
實驗方法：
1. 將大鼠處死后,，用75%酒精消毒,；
2. 用手術剪剖開其四肢皮膚與肌肉，暴露長骨兩端的關節(jié),，取出關節(jié)面滑膜組織置于盛有緩沖液的培養(yǎng)皿中；
3. 剔除滑膜組織外層結構及周邊軟骨組織,，用緩沖液洗2—3次,；
4. 將滑膜組織置于盛有少量小牛血清的培養(yǎng)皿中，剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植塊,；
5. 將制備的植塊接種到螺旋口培養(yǎng)瓶中,。反轉培養(yǎng)瓶，使植有組織塊的一面朝上,，加入培養(yǎng)液,，蓋好瓶蓋。將培養(yǎng)瓶放入含5%CO2的培養(yǎng)箱中在37℃條件下進行培養(yǎng),；
6. 培養(yǎng)4h后,，組織塊較牢黏附于瓶底時，再輕輕反轉培養(yǎng)瓶,，繼續(xù)培養(yǎng),；
7. 培養(yǎng)3d后換培養(yǎng)液。
注意事項    
1.   用0.25% trypsin或0.25% trypsin＋ 0.02% EDTA 或 collagenaseⅠ或collagenaseⅡ消化細胞或合用,，只有單用collagenaseⅠ有用,、；
2.   機械法很難獲得細胞,；
3.  全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM,，加10%胎牛血清,。不能用小牛血清，胎牛血清用國產即可,；
4.  必須用Ca2+-free的PBS,。