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關(guān)鍵詞:多克隆抗體制備技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介:世界*品牌多克隆抗體制備技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,,質(zhì)量保證,*,。
多克隆抗體制備技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,,承諾客戶不成功不收費(fèi),。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌: http://www.。,。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
血清的分離:
如果用三角瓶或平皿盛血,,將器皿傾斜放置于37oC烘箱2hr,轉(zhuǎn)移到4oC沉淀,,第二天早上用吸管吸取血清,。如果用離心管收集,,37oC烘箱放置2hr,轉(zhuǎn)移到4oC沉淀,,第二天早上離心,,10000RCF,10分鐘,。在血清中加入 NaN3 至終濃度0.02%,,分裝后-20oC保存。
抗血清收獲后,,加 1/萬(wàn)硫柳汞或 1/萬(wàn)的疊氮鈉防腐,,或加入等量的中性甘油,分裝小瓶,,置-20℃以下的低溫保存,,數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價(jià)無(wú)明顯變化。注意避免反復(fù)凍融,。也可將抗血清冷凍干燥后保存,。
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟:
1、制備抗原,。
2,、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
3,、動(dòng)物免疫,。
4、試取血進(jìn)行測(cè)試,,看看是否成功免疫,。
5、如果成功免疫,,殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,,采集全部血清。
6,、純化出抗體,。
7、鑒定抗體,。包括純度以及特異性,。
(一)抗原制備
Ig 是免疫球蛋白,對(duì)異種動(dòng)物而言,,是良好的抗原物質(zhì),。可以刺激異種動(dòng)物產(chǎn)生抗 Ig 血清,,
經(jīng)適當(dāng)提取后,,產(chǎn)生抗 Ig 抗體,,又叫第二抗體或抗抗體。在多數(shù)的間接標(biāo)記反應(yīng)中,,均需制備
抗 Ig 抗體。
(二)材料與試劑
1.提取的動(dòng)物 Ig
2.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
3.青霉素和鏈霉素
4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
5.其它材料及試劑
時(shí)間(天) 制備步驟 說明
1 初次免疫 每種抗原免疫5只Balb/c小鼠,,抗原與弗氏*佐劑
14 第二次免疫 抗原與水溶性佐劑
21 第三次免疫 抗原與水溶性佐劑
28 血清效價(jià)檢測(cè) 間接ELISA檢測(cè)血清效價(jià),,效價(jià)達(dá)>1:20000;抗血清效價(jià)>1:10000再次加強(qiáng)一次,,效價(jià)<1:10000終止合同
30 加強(qiáng)免疫 單獨(dú)抗原
三天后采血(血清做陽(yáng)性對(duì)照),,取脾
34 細(xì)胞融合 SP2/0骨髓瘤細(xì)胞與一只小鼠(ELISA效價(jià)較高)的脾細(xì)胞融合
44-56 HAT選擇雜交瘤細(xì)胞 ELISA效價(jià)檢測(cè)篩選陽(yáng)性細(xì)胞克隆(一株)
60-70 細(xì)胞上清送檢 2ml ELISA陽(yáng)性細(xì)胞上清交客戶檢測(cè),,請(qǐng)?jiān)诮拥綐悠泛?周之內(nèi)回復(fù)
細(xì)胞凍存 待客戶檢測(cè)結(jié)果結(jié)束,,確認(rèn)1株細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)的腹水制備
制備腹水并純化 接種細(xì)胞制備腹水及腹水純化(1株)
zui終提供 ?2株雜交瘤細(xì)胞,T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶1瓶
?1株細(xì)胞Protein A/G純化抗體2mg
?完整的技術(shù)服務(wù)報(bào)告
?抗體驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn):免疫原檢測(cè)抗體效價(jià) >1:50000
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