關(guān)鍵詞:蛋白雙向電泳技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌蛋白雙向電泳技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
蛋白雙向電泳技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗,。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展以雙向電泳技術(shù)作為核心. 雙向電泳由O’Farrell’s于1975年建立并成功地分離約1 000個E.coli蛋白，并表明蛋白質(zhì)譜不是穩(wěn)定的,，而是隨環(huán)境而變化. 雙向電泳原理簡明,，*向進行等電聚焦，蛋白質(zhì)沿pH梯度分離,，至各自的等電點；隨后,，再沿垂直的方向進行分子量的分離. 目前,，隨著技術(shù)的飛速發(fā)展，已能分離出10 000個斑點（spot). 當雙向電泳斑點的全面分析成為現(xiàn)實的時候,，蛋白質(zhì)組的分析變得可行,。
SDS-PAGE電泳
⒈ 配制10%的丙烯酰胺凝膠兩塊。配80ml凝膠溶液,，每塊凝膠40ml,，將溶液分別注入玻璃板夾層中，上部留1cm的空間,，用MilliQ水（沒有milliq的話ddh2o也行,，注,，水云深浪按）、乙醇或水飽和正丁醇封面,，保持膠面平整,。聚合30分鐘。一般凝膠與上方液體分層后,，表明凝膠已基本聚合,。
⒉ 待凝膠凝固后，倒去分離膠表面的MilliQ水,、乙醇或水飽和正丁醇,，用MilliQ水沖洗。
⒊ 從-20℃冰箱中取出的膠條,，先于室溫放置10分鐘,，使其溶解。
⒋ 配制膠條平衡緩沖液I,。
5．在桌上先放置干的厚濾紙,，聚焦好的膠條膠面朝上放在干的厚濾紙上。將另一份厚濾紙用MilliQ水浸濕,，擠去多余水分,，然后直接置于膠條上，輕輕吸干膠條上的礦物油及多余樣品,。這可以減少凝膠染色時出現(xiàn)的縱條紋,。
⒍ 將膠條轉(zhuǎn)移至溶漲盤中，每個槽一根膠條,，在有膠條的槽中加入5ml膠條平衡緩沖液I,。將樣品水化盤放在水平搖床上緩慢搖晃15分鐘。
⒎ 配制膠條平衡緩沖液Ⅱ,。
⒏ *次平衡結(jié)束后,，*倒掉或吸掉樣品水化盤中的膠條平衡緩沖液I。并用濾紙吸取多余的平衡液（將膠條豎在濾紙上,，以免損失蛋白或損壞凝膠表面）,。再加入膠條平衡緩沖液Ⅱ，繼續(xù)在水平搖床上緩慢搖晃15分鐘,。
⒐ 用濾紙吸去SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠上方玻璃板間多余的液體,。將處理好的第二向凝膠放在桌面上，長玻璃板在下,，短玻璃板朝上,，凝膠的頂部對著自己。
⒑將瓊脂糖封膠液進行加熱溶解,。
⒒將10×電泳緩沖液,，用量筒稀釋10倍,，成1×電泳緩沖液。趕去緩沖液表面的氣泡,。
⒓第二次平衡結(jié)束后,，*倒掉或吸掉樣品水化盤中的膠條平衡緩沖液Ⅱ。并用濾紙吸取多余的平衡液（將膠條豎在濾紙上,，以免損失蛋白或損壞凝膠表面）,。
⒔將IPG膠條從樣品水化盤中移出，用鑷子夾住膠條的一端使膠面*浸末在1×電泳緩沖液中,。然后將膠條膠面朝上放在凝膠的長玻璃板上,。其余膠條同樣操作。
⒕將放有膠條的SDS-PAGE凝膠轉(zhuǎn)移到灌膠架上,，短玻璃板一面對著自己,。在凝膠的上方加入低熔點瓊脂糖封膠液,。
⒖用鑷子,、壓舌板或是平頭的針頭，輕輕地將膠條向下推,，使之與聚丙烯酰胺凝膠膠面*接觸,。注意不要在膠條下方產(chǎn)生任何氣泡,。在用鑷子、壓舌板或平頭針頭推膠條時,，要注意是推動凝膠背面的支撐膜,，不要碰到膠面。
⒗放置5分鐘,，使低熔點瓊脂糖封膠液*凝固,。
⒘在低熔點瓊脂糖封膠液*凝固后。將凝膠轉(zhuǎn)移至電泳槽中,。
⒙在電泳槽加入電泳緩沖液后,，接通電源，起始時用的低電流（5mA/gel/17cm）或低電壓,，待樣品在*走出IPG膠條,，濃縮成一條線后，再加大電流（或電壓）（20-30mA/gel/17cm）,，待溴酚藍指示劑達到底部邊緣時即可停止電泳。
⒚電泳結(jié)束后,，輕輕撬開兩層玻璃,，取出凝膠，并切角以作記號（戴手套,，防止污染膠面）,。
⒛進行染色,。
樣品要求
1、 樣品新鮮,。
說明：組織樣本及細胞采樣后應(yīng)立即放入液氮中速凍或加入樣品穩(wěn)定劑,，運輸過程中血液、血清樣品4℃保存,，其它樣品-20℃保存,，不超過48小時（若外地郵寄，除血液,、血清及細胞外請用干冰）,。
2、 樣品蛋白的總量不少于1mg,。
說明：組織樣本每份約250-500mg,；
細胞樣品每份106—107細胞數(shù)（一塊膠）；
血液,、血清等樣品大于5mL,，且不能溶血；
蛋白提取物要求蛋白濃度大于5mg/mL,，總量不少于1mg,，且均勻無沉淀，樣品中無鹽成分,；
植物或真菌樣品量濕重不少于2g,；
富含雜質(zhì)或蛋白質(zhì)含量低的樣品量濕重不少于3g。