關(guān)鍵詞:Transwell實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌Transwell實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
Transwell實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí)，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn),。另一方面,，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒?yàn)流程：
(1).共培養(yǎng)體系：
小于3.0um孔徑條件下,，細(xì)胞不會(huì)遷徙通過，因此,，若研究不涉及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力,，不需要細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜，則應(yīng)選擇3.0μm以下孔徑,。常用0.4,、3.0μm。我們實(shí)驗(yàn)室用的是0.4μm,。
將細(xì)胞A種于上室,，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞A的影響,。
(2).趨化性實(shí)驗(yàn)
可用5.0,、8.0、12.0μm膜,，上室細(xì)胞可穿過聚碳酸酯膜進(jìn)入下室,，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映下室成分對上室細(xì)胞的趨化能力。
①細(xì)胞B對細(xì)胞A的趨化作用：將細(xì)胞A種于上室,，細(xì)胞B種于下室,，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞A的趨化作用。
②趨化因子對細(xì)胞的趨化作用：將細(xì)胞種于上室，下室加入某種趨化因子,，可研究該趨化因子對細(xì)胞的趨化作用,。
(3).腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
常用8.0、12.0μm膜,，上室種腫瘤細(xì)胞,，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細(xì)胞會(huì)向營養(yǎng)成分高的下室跑,，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的遷移能力,。
(4).腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
常用8.0、12.0μm膜,，原理與腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)類似,。
② 上層培養(yǎng)液：
上層培養(yǎng)液采用無血清培養(yǎng)基，為維持滲透壓,，需加入0.05%-0.2% BSA,。
③ 細(xì)胞：
值得注意的是，有侵襲能力的細(xì)胞才可用于Transwell侵襲實(shí)驗(yàn),。建議實(shí)驗(yàn)前先用酶譜法檢測MMPs的表達(dá),，特別是MMP-2的表達(dá)。如果不清楚細(xì)胞MMPs的表達(dá)情況,，就盲目進(jìn)行Transwell侵襲實(shí)驗(yàn),，可能會(huì)造成不必要的浪費(fèi)，一次Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)花錢少則數(shù)百,，多則數(shù)千,，并不是筆小數(shù)目，還是小心為妙,。
另外,，為了讓實(shí)驗(yàn)結(jié)果更明顯，可先撤血清讓細(xì)胞饑餓12－24h,，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。
④ 基質(zhì)膠：
常用的是人工重構(gòu)基底膜材料Matrigel，主要成分為層黏連蛋白和Ⅳ型膠原,，生產(chǎn)廠家有BD,、美國Collaborative Rsearch公司等。CaoY戰(zhàn)友的帖這么說的：Matrigel是BD公司生產(chǎn)的,，是一種細(xì)胞外基質(zhì),，4度時(shí)是液體，在37度會(huì)逐漸凝固成膠狀,，不可逆,。同樣的東西在sigma叫ECM,。zhangyong1036戰(zhàn)友提供的價(jià)格：BD公司的matrigel 1500左右。
如果購買的小室是已經(jīng)鋪好基質(zhì)膠的,，那么Matrigel就不需要購買了。
⑤ 下層培養(yǎng)液：
下層常用含5%－10% FBS的培養(yǎng)基,，具體濃度根據(jù)細(xì)胞侵襲力而定,，侵襲力弱的細(xì)胞可適當(dāng)提高FBS濃度。下層也可用趨化因子,，有戰(zhàn)友將纖維粘連蛋白加入下層培養(yǎng)液作為趨化因子,，但個(gè)人認(rèn)為，F(xiàn)BS仍是zui合適的,。
⑥ 細(xì)胞培養(yǎng)板：
常用于Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)板有6孔板,、12孔板、24孔板等,，以24孔zui常用,。細(xì)胞培養(yǎng)板沒什么特殊要求，普通的細(xì)胞培養(yǎng)板就可以,。但要注意,，細(xì)胞培養(yǎng)板應(yīng)當(dāng)與購買的Transwell小室相配套。
⑦ 此外,，膜的下室面可涂上纖維粘連蛋白(fibronectin,，F(xiàn)N，Sigma有售),，這樣做的目的是使穿過膜的細(xì)胞更好地附著在膜上,，也可用膠原（collagen）或明膠（gelatin）,。很多戰(zhàn)友認(rèn)為這不是必須的，而且我也是不涂的，細(xì)胞照樣貼壁很好,。如果貼壁不好的話可以試試看。linanping1979戰(zhàn)友認(rèn)為,，如果培養(yǎng)時(shí)間很長（>24h）,，細(xì)胞還是會(huì)掉到下室里面去，所以有條件的話,，還是在膜下層涂上FN,。