關(guān)鍵詞:Southern Blot技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌Southern Blot技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*,。
Southern Blot技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗,。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>一、 待測核酸樣品的制備
(一)制備待測DNA
基因組DNA是從動物組織(或)細胞制備,。1.采用適當?shù)幕瘜W試劑裂解細胞,，或者用組織勻漿器研磨破碎組織中的細胞;2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白質(zhì)和RNA;3.用有機試劑(酚/氯仿)抽提方法去除蛋白質(zhì)。
(二) DNA限制酶消化
基因組DNA很長,，需要將其切割成大小不同的片段之后才能用于雜交分析,，通常用限制酶消化DNA。一般選擇一種限制酶來切割DNA分子,，但有時為了某些特殊的目的,，分別用不同的限制酶消化基因組DNA。切割DNA的條件可根據(jù)不同目的設(shè)定,，有時可采用部分和充分消化相結(jié)合的方法獲得一些具有交叉順序的DNA片段,。消化DNA后,，加入EDTA，65℃加熱滅活限制酶,樣品即可直接進行電泳分離,，必要時可進行乙醇沉淀,，濃縮DNA樣品后再進行電泳分離。
預雜交(prehybridizafion)
(一) 配制預雜交液:6XSSC,，5XDenhardt's試劑,，0.5%SDS，50%(v/v)甲酰胺,，ddH2O,，100ug/ml鮭魚精DNA變性后加入。注:1.每平方硝酸纖維素膜需預雜交液0.2ml,。2.預雜交液制備時可用或不用poly(A)RNA,。3.當使用32P標記的cDNA作探針時，可以在預雜交液或雜交液中加入poly(A)RNA以避免探針同真核生物DNA中普遍存在的富含胸腺嘧啶的序列結(jié)合,。4.按照探針,、靶基因和雜交液的特性確定合適的雜交溫度(Thyb)。(如果使用標準雜交液,，靶序列DNA GC含量為40%,，則Thyb為42℃。)
(二)把預雜交液放在滅菌的塑料瓶中,，在水浴中預熱至雜交溫度,。
(三)將表面帶有目的DNA的硝酸纖維素濾膜放入一個稍寬于濾膜的塑料袋，用5-10ml2×SSC浸濕濾膜,。
(四)將鮭魚精DNA置沸水浴中10min,，迅速置冰上冷卻1-2min，使DNA變性,。
(五)從塑料袋中除凈2×SSC,，加入預雜交液，按每平方濾膜加0.2ml,。
(六)加入變性的鮭魚精DNA置終濃度200μg/ml,。
(七)盡可能除凈袋中的空氣，用熱封口器封住袋口,，上下顛倒數(shù)次以使其混勻,，置于42℃水浴中溫育4h.
Southern雜交
(一)原理
轉(zhuǎn)印后的濾膜在預雜交液中溫育4-6h，即可加入標記的探針DNA(探針DNA預先經(jīng)加熱變性成為單鏈DNA分子),，即可進行雜交反應(yīng),。雜交是在相對高離子強度的緩沖鹽溶液中進行。雜交然后在較高溫度下用鹽溶液洗膜。離子強度越低,，溫度越高,，雜交的嚴格程度越高，也就是說,，只有探針和待測順序之間有非常高的同源性時,，才能在低鹽高溫的雜交條件下結(jié)合。
(二) 步驟
1.將標記的DNA探針置沸水浴10min,，迅速置冰上冷卻1-2min,，使DNA變性。
2.從水浴中取出含有濾膜和預雜交液的塑料袋,，剪開一角，將變性的DNA探針加到預雜交液中,。
3.盡可能除取袋中的空氣,，封住袋口，滯留在袋中的氣泡要盡可能地少,，為避免同位素污染水浴,，將封好的雜交袋再封入另一個未污染的塑料袋內(nèi)。
4.置42℃水浴溫育(至少18h),。
結(jié)果注意:
在膜上陽性反應(yīng)呈帶狀,。實驗中應(yīng)注意以下問題:轉(zhuǎn)膜必需充分，要保證DNA已轉(zhuǎn)到膜上,。雜交條件及漂洗是保證陽性結(jié)果和背景反差對比好的關(guān)鍵,。洗膜不充分會導致背景太深，洗膜過度又可能導致假陰性,。若用到有毒物質(zhì),，必需注意環(huán)保及安全。
主要應(yīng)用:
1.遺傳病診斷
2.DNA圖譜分析
3.檢測樣品中的DNA及其含量
4.PCR產(chǎn)物分析