關(guān)鍵詞:IP和Co-IP服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌IP和Co-IP服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
IP和Co-IP服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗,。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）可以：（1）測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；（2）確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔；（3）分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物,。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。
其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時,，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來,。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來,。目前多用精制的proreinA預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上,，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads上的proreinA就能吸附抗原達到精制的目的,。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法,。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來,。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,。
具體操作：
收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑）,，冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°c,， zui大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清；
取少量裂解液以備western blot分析,，剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細胞裂解液,，4°c緩慢搖晃孵育；
取10μl protein a 瓊脂糖珠,，用適量裂解緩沖液洗3 次,，每次3,000 rpm離心3 min；
將預(yù)處理過的10μl protein a 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育的細胞裂解液中4°c緩慢搖晃孵育2-4h,，使抗體與protein a瓊脂糖珠偶連,；
免疫沉淀反應(yīng)后，在4°c 以3,000 rpm 速度離心3 min,，將瓊脂糖珠離心至管底,；將上清小心吸去,，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次；zui后加入15μl的2×sds 上樣緩沖液,，沸水煮5分鐘,；
sds-page, western blotting或質(zhì)譜儀分析。
通過免疫共沉淀確定結(jié)合蛋白 
1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養(yǎng)板上的適宜細胞,。刮去每塊板上的細胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中,；
2．將每毫升細胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中，在微量離心機上4℃以zui大速度離心15 ,；
3．收集上清（約30 ml）并加入30 μg的適當抗體,，4℃搖動免疫沉淀物1 h；
4．加入0.9 ml的蛋白質(zhì)A-Sepharose 懸液,，4℃搖動免疫沉淀物30 min,；
5．用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物，再重復(fù)洗5次,。zui后,，用NETN洗一次；
6．吸出混合物的液體部分,。加入800 μl的1×SDS膠加樣緩沖液到球珠中,，煮沸4 min
7．將樣品加入到大孔的不連續(xù)SDS-PAGE梯度膠中，在10 mA的恒定電流下電泳,；
8．通過考馬斯亮藍染色觀察蛋白質(zhì)泳帶,；
9．從膠上切下目標帶，將其放到微量離心管中,，用1 ml 50%乙腈洗兩次,，每次3 min；
10． 用胰蛋白酶消化膠中的蛋白質(zhì),，再將肽電洗脫；
11． 通過窄孔液相色譜分離肽,。將收集的肽在ABI 477A或494A機器上進行自動Edman降解測序,。