關(guān)鍵詞:細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶(hù)不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶(hù)可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
概念：
細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率，表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量,。貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆,，而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞?？寺⌒纬陕史从臣?xì)胞群體依賴(lài)性和增殖能力兩個(gè)重要性狀,。
1．試劑與材料
(1)供融合用的脾細(xì)胞及骨髓瘤細(xì)胞。
(2)1640培養(yǎng)液100ml,。
(3)*1640液100ml,。
(4)2.5%FCS－1640液50ml。
(5)HAT培養(yǎng)液100ml,。
(6)50%PEG：取分子量4000,，高純度的（日本進(jìn)口或Serva）PEG10g放入25ml瓶中高壓滅菌，使用前用預(yù)熱于40℃的1640液10ml等量（W/V）混合,，以酚紅檢查pH,，一般不必調(diào)pH。如pH有改變,，可用HCl或NaHCO3調(diào)整,。
(7)10ml和50ml的滅菌沉淀管或瓶。
(8)40孔塑料培養(yǎng)盤(pán)。
2．操作方法
⑴準(zhǔn)備好脾細(xì)胞,。
⑵在50ml沉淀管中混合108脾細(xì)胞和107小鼠骨髓瘤細(xì)胞,，并加入50ml2.5%FCS－1640液。
⑶室溫400g離心3min,，使細(xì)胞沉淀,。
⑷移去上清液。
⑸輕敲管底部,，使沉淀流動(dòng),，把沉淀管放于40℃水浴中，使其達(dá)融合溫度,。
⑹加預(yù)熱至40℃的50%PEG0.8ml,，用1ml吸管緩慢滴加，邊加邊搖沉淀管,，肉眼觀察可見(jiàn)有顆粒出現(xiàn),，滴加過(guò)程要求持續(xù)2min。
⑺加1ml1640液,，邊加邊搖動(dòng),，持續(xù)1min。
⑻重復(fù)⑺一次,。
⑼加1ml1640液,，邊加邊搖動(dòng)，持續(xù)0.5min,。
⑽重復(fù)⑼一次,。
⑾加1640液15ml。
⑿室溫,，400g離心1min，使細(xì)胞沉淀,。
⒀去上清,，輕敲管底部，加25ml含有HAT的*1640液,。
⒁往已于前一日種有飼養(yǎng)細(xì)胞的40孔塑料培養(yǎng)盤(pán)中滴加融合的細(xì)胞液,，每孔1滴（約0.05ml）。
⒂輕搖后,，放入5%CO2飽和濕度的37℃溫箱中培育,。
⒃第3、6,、9,、10日換入含HAT的*1640培養(yǎng)液。注意輕輕吸取上清液,，勿將固定于孔底的細(xì)胞吸出,，根據(jù)需要加入適量的飼養(yǎng)細(xì)胞,。
⒄于第12、15日加入含有HAT的*1640培養(yǎng)液,。在每次換液前用倒置顯微鏡觀察,，大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)出來(lái)。大多數(shù)雜交瘤細(xì)胞在10~20天內(nèi)出現(xiàn),，但也有在1個(gè)月左右才能出現(xiàn)的,。雜交瘤細(xì)胞出現(xiàn)后，吸取上清液,，檢查抗體,。
⒅對(duì)繼續(xù)生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行增殖傳代。在傳代過(guò)程中,，依情況取消HAT液和*1640液而代之以10%FCS－1640液,。同時(shí)保存于液氮和進(jìn)行克隆化，在這期間每代都要檢查抗體,，以防止產(chǎn)生抗體細(xì)胞的變異和丟失,。
注意事項(xiàng)：
1、雖然本試劑盒過(guò)期后很久還有使用價(jià)值但還是請(qǐng)您在有效期內(nèi)使用,。
2,、在檢測(cè)腹水類(lèi)單抗時(shí)要稀釋到1/5萬(wàn)，雖然可以分辨但并不建議您這樣做,。此類(lèi)樣品成分十分復(fù)雜,，有干擾結(jié)果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的C030215抗體鑒定試劑,。它會(huì)給您帶來(lái)滿(mǎn)意的結(jié)果,。
3、手洗板子時(shí)一定要把孔加滿(mǎn),，停留10秒然后棄盡,，zui后要拍干凈。特別是在酶標(biāo)二抗溫育后洗板時(shí)一定要把酶吸出而不是甩出,，要吸凈,。這個(gè)在手工洗板時(shí)對(duì)結(jié)果很重要。
4,、一次沒(méi)用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好,，隨盒存放。
5,、拿放板子時(shí)不要?jiǎng)×叶秳?dòng),，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果。
6、出現(xiàn)異常結(jié)果請(qǐng)隨時(shí)咨詢(xún)我們,。