人醛固酮(ALD)ELISA Kit

人醛固酮(ALD)ELISA Kit標本必須為液體，不含沉淀,。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類,。

培養(yǎng)基 :"*培養(yǎng)基有售,，用我們拜力生物的*培養(yǎng)基,，細胞培養(yǎng)更省心！"

供應商 :拜力生物

貨期 :7-10天

1.  試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫,，使用后請立即按照說明書要求保存試劑,。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染,。

2.   加樣：加樣或加試劑時,，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時,，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,，將會導致不同的 “預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性,。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣,。

3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā),，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā),；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度,。

4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響后的酶標儀讀數(shù),。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標準品,、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應的稀釋液配制,，不能混淆。請確配置標準品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差,；請勿重復使用已稀釋過的標準品,、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,，每隔10分鐘),，如顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù),。

7.  底物：底物請避光保存,，在儲存和溫育時避免強光直接照射。

建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,，以保證檢測結(jié)果的準確性,。

如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定,，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

洗板方法

1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次,。

2.  自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算

以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標),，OD值為橫坐標(對數(shù)坐標),，在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,，如curve expert 1.3,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

◇      液體類標本

標本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類,。

◇      血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清,。如有沉淀形成,，應再次離心。

◇      血漿：

應根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。如有沉淀形成，應再次離心,。

◇      尿液,、胸腹水、腦脊液：

用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。如有沉淀形成,，應再次離心,。

◇      細胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。

現(xiàn)在一般完整的試劑盒應該有一下幾個組成：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）,；

（2）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）,；

（3）酶的底物；

（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中）,，參考標準品和控制血清（定量測定中）,；

（5）結(jié)合物及標本的稀釋液,；

（6）洗滌液，在板式ELISA中,，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水,；

（7）酶反應終止液，常用的HRP反應終止液為硫酸,，其濃度按加量及比色液的體積而異,，在板式ELISA中一般采用3mol/L。

血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。收集上清。如有沉淀形成,，應再次離心,。血漿：應根a據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。如有沉淀形成，應再次離心,。尿液,、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。如有沉淀形成,，應再次離心,。細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,。

發(fā)酵/代謝物經(jīng)驗帶來了另一個有益的產(chǎn)品線。這是向體外診斷（IVD）醫(yī)療設(shè)備行業(yè)提供離子載體組分,。自然發(fā)酵離子載體,，如纈氨霉素，離子霉素,，A23187,，尼日利亞菌素,，無活菌素，恩鐮孢素,，丙甲菌素,，...用作離子選擇電極（ISE）。

合成地,，產(chǎn)生的離子載體如鋰離子載體VIII,，CA-1001，莫能菌素甲酯 ......可用作ISE,，以及基于離子載體的光學傳感器（IBOS）,。這些化合物在快速增長的可穿戴生物傳感器市場中具有很大的前景，并已被證明是不斷增長的市場,。

在酶反應中,，將固定在孔上的夾心復合物與底物溶液一起溫育，然后通過分光光度微量滴定板讀數(shù)器測量,。與孔結(jié)合的復合物的酶活性與樣品中FGF-23的量成正比,。通過繪制吸光度對比FGF-23標準品的每種濃度來產(chǎn)生標準曲線。從該曲線確定樣品中FGF-23的濃度,。

洗板方法

1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次,；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要,，重復此過程數(shù)次,。

2.  自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。

計算

以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標),，OD值為橫坐標(對數(shù)坐標)，在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中,。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果,。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,*加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,
從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性,。而且,洗滌不充分將影響試驗結(jié)果,。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標簽上的標示為準。
4. 濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正?，F(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
6. 中,英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準,。
7. 所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。
實驗方法：
酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）凡購買目錄本公司ELISA檢測試劑盒可提供代測服務。
檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
保存：2-8℃
樣品類型（SAMPLE TYPES）：
標本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清
或血漿,。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書,。