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技術(shù)文章

斜面培養(yǎng)基的制作方法

閱讀:3513          發(fā)布時(shí)間:2022-11-17


  有一種簡(jiǎn)捷快速制備斜面培養(yǎng)基的方法,現(xiàn)介紹如下:

  制作培養(yǎng)基斜面,傳統(tǒng)的方法是將試管每10支為一組扎成一捆,,高壓滅菌后,一支一支地?cái)[成斜面,,操作比較煩瑣,,占用面積又多,造成諸多不便,。

  1,、將膠合板截成長(zhǎng)18厘米(與試管長(zhǎng)度相等或略短)、寬9厘米(比并排5支試管直徑的總和略窄)的小塊備用,。

  2,、在并排5支試管上面平置截好的膠合板,再在膠合板上面并排放5支試管,,然后將試管的上,、下端分別用牛皮紙包好,用線扎緊,,使膠合板兩側(cè)的試管保持平行,,置高壓鍋中滅菌。

  3,、高壓滅菌后,,經(jīng)自然冷卻,待氣壓降至零時(shí),,將高壓鍋的鍋蓋打開點(diǎn),,當(dāng)棉塞水分充分蒸發(fā)后取出,,不用拆捆,直接擺成斜面,。大量制斜面時(shí),,既快捷又很少占用空間,非常方便,,還便于保溫,,減緩凝結(jié)速度,充分吸收游離水分,。

  4,、如需將斜面培養(yǎng)基保存一段時(shí)間,可在滅菌前將聚丙烯塑料袋套在試管外并扎緊袋口,,滅菌后取出,,直接擺成斜面,可防止水分蒸發(fā),。

顯色培養(yǎng)基.jpg

1,、配制溶液

  向容器內(nèi)加入所需水量的一部分,按照培養(yǎng)基的配方,,稱取各種原料,,依次加入使其溶解,最后補(bǔ)足所需水分,。對(duì)蛋白胨,、肉膏等物質(zhì),需加熱溶解,,加熱過(guò)程所蒸發(fā)的水分,,應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足。

  配制固體培養(yǎng)基時(shí),,先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸,,再將稱好的瓊脂加入,繼續(xù)加熱至完/全融化,。并不斷攪拌,,以免瓊脂糊底燒焦。

  2,、調(diào)節(jié)pH值

  用pH試紙(或pH電位計(jì),、氫離子濃度比色計(jì))測(cè)試培養(yǎng)基的pH值,如不符合需要,,可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié),直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止,。

  3,、過(guò)濾

  用濾紙,、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過(guò)濾。用紗布過(guò)濾時(shí),,最好折疊成六層,,用濾紙過(guò)濾時(shí),可將濾紙折疊成瓦棱形,,鋪在漏斗上過(guò)濾,。

  4、分裝

  已過(guò)濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝,。如果要制作斜面培養(yǎng)基,,須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體,、半固體培養(yǎng)基,,則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶?jī)?nèi)。

  分裝時(shí),,一手捏松彈簧夾,,使培養(yǎng)基流出,另一只手握住幾支試管或錐形瓶,,依次接取培養(yǎng)基,。分裝時(shí),注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口,,以免浸濕棉塞引起雜菌污染,。

  裝入試管的培養(yǎng)基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定,。一般制作斜面培養(yǎng)基時(shí),,每只15×150毫米的試管,約裝3~4毫升(1/4~1/3試管高度),,如制作深層培養(yǎng)基,,每只20×220毫米的試管約裝12~15毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基,,一般以其容積的一半為宜,。

  5、加棉塞

  分裝完畢后,,需要用棉塞堵住管口或瓶口,。堵棉塞的主要目的是過(guò)濾空氣,避免污染,。棉塞應(yīng)采用普通新鮮,、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無(wú)法使用,。制作棉塞時(shí),,要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度,揪取手掌心大小一塊,,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,,用右手食指插入棉花中部,同時(shí)左手食指與拇指稍稍緊握,,就會(huì)形成1個(gè)長(zhǎng)棒形的棉塞,。棉塞作成后,應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中,,棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙,,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過(guò)緊過(guò)松,,塞好后,,以手提棉塞、管,、瓶不下落為合適,。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶?jī)?nèi),上端露出少許棉花便于拔取,。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札,,準(zhǔn)備滅菌。

  6,、制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基

  培養(yǎng)基滅菌后,,如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行,。

  (1)制作斜面培養(yǎng)基,。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放1支長(zhǎng)0.5~1米左右的木條,厚度為1厘米左右,。將試管頭部枕在木條上,,使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,凝固后即成斜面培養(yǎng)基,。

  (2)制作平板培養(yǎng)基,。將剛剛滅過(guò)菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,點(diǎn)燃酒精燈,,右手托起錐形瓶瓶底,,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,,左手打開培養(yǎng)皿蓋,,右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度,。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,,待培養(yǎng)基凝固后,再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊,,倒置過(guò)來(lái),平放在恒溫箱里,,24小時(shí)后檢查,,如培養(yǎng)基末長(zhǎng)雜菌,即可用來(lái)培養(yǎng)微生物,。


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