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技術(shù)文章

默克細(xì)胞培養(yǎng)扳的相關(guān)知識

閱讀:995          發(fā)布時間:2022-11-16

  細(xì)胞培養(yǎng)板緊密貼合的孔蓋,可有效防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基的污染與蒸發(fā)的損耗,。


  細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時同樣遵循嚴(yán)格無菌的原則,,各項(xiàng)操作要保證規(guī)范、科學(xué),,不對細(xì)胞的生長造成額外的影響,。這其中最常見的問題就是如何保證加樣后細(xì)胞的均勻和盡量減少換液對細(xì)胞生長狀態(tài)的影響。


  24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿的蓋子都很松,,這樣是方便了透氣,,但是細(xì)菌、霉菌等污染物會不會也隨著溜進(jìn)去呢,?


  蓋子很松,,屬于半開放培養(yǎng),這樣的目的是透氣(實(shí)際上是為了使培養(yǎng)皿外的CO2能夠與培養(yǎng)皿充分交換,,維持培養(yǎng)基的pH值),。


  凡事有利必有弊,這樣當(dāng)然增加了污染的可能性,。此外這樣還會使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā),,這對于精確定量的藥物來說就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔(定期紫外線照,,酒精擦洗,,盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱)b培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為100%(培養(yǎng)箱內(nèi)放置無菌蒸餾水的水槽)。


  就好像培養(yǎng)皿,,也是一個蓋倒扣的容器,,也不會污染,。主要是因?yàn)樯w子“L"型邊緣產(chǎn)生氣流負(fù)壓的緣故,,灰塵上面才附著有微生物,而氣流攜帶的灰塵是無法通過產(chǎn)生負(fù)壓的蓋邊緣的,。而透氣作用只是通過空氣的擴(kuò)散,,不會產(chǎn)生氣流,所以只會透氣不會透菌,。


  培養(yǎng)過細(xì)胞的人都知道,,細(xì)胞如何的嬌貴,日復(fù)一日精心地呵護(hù),,一個不慎就全軍覆沒,。細(xì)胞培養(yǎng),,從來就不是一個容易的過程。那么關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的基本知識你又了解多少呢,?


  首先,,操作前準(zhǔn)備工作:


  1、玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上,;2)干烤消毒140度2小時以上,;


  2、無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈,,紫外線照射40分鐘以上,;各種培養(yǎng)板照射3小時以上;


  3,、培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗(yàn):將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi),,用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天,肉眼見無渾濁或沉淀等異物,。分裝后置-20度保存,;


  4、消化液(pH7.8)或其它加入液,,應(yīng)用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌,,分裝成支置-20度保存;


  5,、各種凍存的液體復(fù)溫時應(yīng)邊搖邊融化,,否則有的液體(特別是培養(yǎng)基)容易產(chǎn)生沉淀;


  6,、培養(yǎng)箱應(yīng)先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外線的應(yīng)照射1小時以上,,如有高溫滅菌的應(yīng)按程序來菌)。至少每月一次,;


  7,、進(jìn)入操作時應(yīng)注意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦拭,,操作時注意無菌臺內(nèi)空間層次,;手及物品不要在暴露的瓶口上方來往,如果數(shù)量較多,,培養(yǎng)瓶應(yīng)放在與酒精燈平行地方便于操作,,瓶與瓶之間應(yīng)相隔一定的距離,開瓶(蓋)時應(yīng)先用75%酒精反復(fù)擦拭或用燈燒,,開開后應(yīng)用燈先燒口,,然后燒蓋。用完后同樣操作,。整個操作過程盡量在無菌臺靠里面一點(diǎn),。



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