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液相色譜儀最常見的故障一是堵,二是漏,。下面就這兩點分別展開討論,。(注:流動相以甲醇為例,色譜柱以C18為例)“堵"的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高,,直接原因就是流路不暢,。
堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端,,最主要原因就是流動相里有雜質(zhì),雜質(zhì)的主要來源就是細菌,。
首先我們要認識到,,一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理,直接使用沒有問題,。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì),,也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除,真正容易引起問題的,,是水中的細菌,。新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌,而這些細菌雖然肉眼不可見,,卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙,,造成柱子很快報廢。
解決它的方法很簡單,,就是確保水的可靠性,。這里有兩種方式推薦:
(1)當然是購買實驗室專用純水機,既方便又可靠,,質(zhì)量也放心,。缺點就是價格不菲。
(2) 成箱購買市售品牌純凈水,,如500ml 一支的怡寶或娃哈哈,,這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。
這里特別指出一個細節(jié):在絕大多數(shù)書本上,,凡談到配制流動相都會談到最后有一個過濾的步驟,。
從使用的實際情況來看有幾點需要注意:
(1)流動相過濾實際操作時由于不可能做到專瓶專用,容易造成的交叉污染,,對于配比復(fù)雜的流動相影響更大,。所以用完后一定要沖洗干凈。用前不放心的話也可以沖洗下,。
指的是:流動相剛開始沒有長菌,在使用時卻產(chǎn)生了細菌污染,。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的,。
舉例子:50%的甲醇水流動相,有兩種使用方式,。一種方式是在上機前就配好混合在一起,,另一種方式是在流路A放純甲醇,流路B放純水,。
從單純實驗效果來說,,后一種有明顯的優(yōu)點:首先是簡單,,不需要實驗者另個計算配比混合,其次就是比例準確,,能得到保留時間重復(fù)性的實驗效果,。
但是,它有一個致命的缺陷,,就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相,,而是用緩沖鹽溶液,本身就是優(yōu)質(zhì)肥料,,細菌長得更迅速),,一旦有細菌柱子就壞得很快,。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水,,更要求在每次實驗后把水相換掉,換成甲醇沖洗干凈,,這一點在實際工作中很多人意識不強,,就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏,但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響,。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的,。
"堵"的原因之三:不適當操作。
常見問題的有以下幾種:
(1)在更換零件時選擇的型號有誤,,或者管線材質(zhì)不達標,接口不是很匹配,,在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。
(2)樣品處理液凈化得不干凈,,長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢,。
(3)在使用手動六通閥時,有些人可能由于手勁小的原因,,轉(zhuǎn)動的不到位,,于是造成流路形成了死堵,壓力快速升高超過警戒值.自動進樣的情況類似,,若六通閥卡死,,也會形成死堵,導(dǎo)致超壓 (2)使用儀器不當
如果是輸送泵漏液,最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析出造成,。
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