制備型高效液相色譜儀通常都被認(rèn)為和大容量色譜柱和高流速有關(guān)聯(lián)的,。然而并不是以設(shè)備的大小和系統(tǒng)消耗的流動(dòng)相的多少來決定制備高效液相色譜,，而是依據(jù)分離目的來決定。與分析液相不同,，制備液相的目的是對(duì)產(chǎn)品的單體進(jìn)行提取和純化,。關(guān)于制備液相小析姐今天要跟你聊一下，快準(zhǔn)備好你的小本本吧,。

與傳統(tǒng)的純化方法（如蒸餾,、萃取）比較,，制備液相是一種更有效的分離方法,，因此被廣泛應(yīng)用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上。隨著合成,、植化,、生化和制藥等領(lǐng)域?qū)Ω呒兌冉M份的需求不斷增加，制備型液相色譜儀應(yīng)用的領(lǐng)域也在迅速的擴(kuò)大發(fā)展,。

制備液相與分析液相的區(qū)別

和制備液相對(duì)應(yīng)的,，是分析液相。它們的最大差別,，不在于外形,，而在于目的,。分析液相的目的當(dāng)然是為了分析樣品，有什么成分,，含量多少,，也叫做定性定量。要做好分析液相,，最關(guān)注的是分離度和靈敏度,，要分得開，測(cè)得到,，測(cè)得準(zhǔn),。而制備液相是利用色譜柱的分離能力，來去除雜質(zhì),，得到高純樣品,。為什么強(qiáng)調(diào)純度呢？
在實(shí)驗(yàn)室里,，紅外,、紫外、核磁這些儀器,，都要求樣品達(dá)到足夠的純度,，才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。除了實(shí)驗(yàn)室,，藥品的生產(chǎn)也需要純化,，特別是生物制品和藥劑。很多生物制品如果是直接吃下去,，跟吃個(gè)雞蛋也沒什么不同,，直接注射才能保留活性成份。而注射治療,，藥物會(huì)直接進(jìn)入血液,，所以純度非常重要。在實(shí)驗(yàn)室里,，用于制備的液相,，配置和普通的分析液相差不多。有泵,，有進(jìn)樣器,，有柱子，有檢測(cè)器,。為了收集分離出來的化合物,，制備液相通常還配一個(gè)餾分收集器。餾分收集器就像液相色譜的收納盒,，把每次分析的同類物質(zhì)收納到一起,。餾分收集器可以直接串聯(lián)在檢測(cè)器后面。也可以連接一個(gè)三通,，和檢測(cè)器并聯(lián),，都接在色譜柱的后面。有些實(shí)驗(yàn)室里需要收集的量很大,，一個(gè)餾分收集器裝不完,，還可以并聯(lián)好幾個(gè)。根據(jù)檢測(cè)器的信號(hào)顯示,，當(dāng)化合物出峰的時(shí)候,，儀器會(huì)自動(dòng)收集。一般按照時(shí)間編程,，也可以根據(jù)檢測(cè)器的信號(hào)強(qiáng)度自動(dòng)觸發(fā),。一個(gè)個(gè)化合物通過餾分收集器收集到小瓶或者試管里，也可以通過管路連接到更大的瓶子,。
制備液相有很多種分類方法,，比如按壓力分類，或者按產(chǎn)量分類,，彼此之間有交叉,，沒有明確的標(biāo)準(zhǔn)。不同類型的制備液相有著不同的特點(diǎn),。比如這根用在生產(chǎn)上的制備液相柱,，模樣和實(shí)驗(yàn)室里有些不同。僅僅內(nèi)徑就有1.6m,，色譜柱的重量有36噸重,，每天消耗的流動(dòng)相能放滿半個(gè)小游泳池。除了特別大的,，還有特別小的,。比如微克級(jí)制備，也常被稱為微量制備,，它的有趣之處在于微量餾分收集器,，可以直接使用MALDI點(diǎn)樣板。

制備色譜柱的材質(zhì)及其特點(diǎn)

各種規(guī)格的玻璃柱子在實(shí)驗(yàn)室里頭很容易得到,，而且價(jià)格低廉,，但玻璃柱子致命的弱點(diǎn)是它能承受的壓力很小，且非常容易破碎,。當(dāng)由于壓力太小而導(dǎo)致流動(dòng)相流速很慢的時(shí)候,，高位液面或加高壓空氣（或者氮?dú)猓┑牟捎檬且粋€(gè)簡(jiǎn)單的解決辦法。在底下加真空,，也能在一定程度上解決這個(gè)問題,。
不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕,、抗壓力性能，但其價(jià)格相對(duì)很貴,。如果,，只有很小的分離項(xiàng)目且經(jīng)費(fèi)也允許，選擇市面上直徑為1cm的小型制備柱,。有機(jī)玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕,，相對(duì)不銹鋼柱子而言，它是半透明的,，可以看到液體的運(yùn)行狀態(tài),，對(duì)有色的物質(zhì)其特點(diǎn)就更為突出。

裝柱方法的選擇

根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸,，采用不同的裝柱方法,，往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大,，顆粒度的減少會(huì)導(dǎo)致裝柱的難度,。一般來說，顆粒直徑小于20－30um的固定相采用濕法裝填,。所謂“敲擊－裝填"技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相,。濕法的目的是迫使相對(duì)稀松的 固定相懸漿以高速裝入色譜柱子，從而減少空隙的形成,。然而,，當(dāng)柱直徑大于20mm，所加壓力為30－40bar時(shí),，高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復(fù)雜,。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱，可采用柱長(zhǎng)壓縮技術(shù),。這種方法,，先將固定相懸漿（或偶爾是干填充物）裝入柱中加壓，利用物理方法將其壓緊,。壓緊的方法有兩種：徑向壓縮和軸向壓縮,。濕法裝柱需要一定的設(shè)備，在柱子填完后,，應(yīng)用有柱效的測(cè)量,，對(duì)柱效低的柱子應(yīng)該重填。

流動(dòng)相的選擇

除了和分析色譜同樣的考慮外,，在選用流動(dòng)相時(shí),，要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作。一般來說，不宜采用高毒性溶劑,，對(duì)多元溶劑要盡可能的少用,。如果產(chǎn)品中含有大量溶劑，溶劑的純度也要考慮在其中,。

組分保留時(shí)間的估計(jì)

用分析柱子在同等色譜條件下（同樣的固定相和流動(dòng)相）測(cè)定保留時(shí)間后,，按照單一組分的線流速（不是體積流速）一定，通過計(jì)算可以知道組分的大致保留時(shí)間區(qū)域,。分析譜圖的峰形狀，對(duì)確定保留時(shí)間也有很大的參考價(jià)值,。

產(chǎn)品的收集

手工餾分收集費(fèi)時(shí)費(fèi)力,，自動(dòng)餾分收集器有很大的方便。許多實(shí)驗(yàn)室和工廠都采用了餾分收集器,。

超載,、邊緣切割、中心切割,、放大技術(shù)與非線性效用

在制備色譜中,，因?yàn)闆]有必要達(dá)到分析色譜那樣的分離度，可以在一定范圍內(nèi)大大加大進(jìn)樣的濃度和體積,。在做分離的時(shí)候,，也有一些分析色譜的時(shí)候，不能用到的技巧,。因?yàn)槠P(guān)系,，不在這里敘述。

柱轉(zhuǎn)換技術(shù)

通過接頭或者閥門,，實(shí)現(xiàn)柱子的簡(jiǎn)單延長(zhǎng),，或者比較方便地實(shí)現(xiàn)對(duì)其中一個(gè)（或幾個(gè)）組分的精制。

新制備技術(shù)

模擬移動(dòng)床可以連續(xù)進(jìn)樣,，并可以利用邊緣切割效用,，而且采用了柱切換技術(shù)，能更好的利用溶劑和填料,，已經(jīng)應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn),。其理論和技術(shù)也日益完善。迎頭色譜,、超臨界流體色譜,、逆流色譜環(huán)形色譜、氣相制備色譜等在科研和工業(yè)生產(chǎn)中也得到了應(yīng)用,。