制備型高效液相色譜儀通常都被認(rèn)為和大容量色譜柱和高流速有關(guān)聯(lián)的。然而并不是以設(shè)備的大小和系統(tǒng)消耗的流動相的多少來決定制備高效液相色譜,，而是依據(jù)分離目的來決定,。與分析液相不同，制備液相的目的是對產(chǎn)品的單體進(jìn)行提取和純化,。關(guān)于制備液相小析姐今天要跟你聊一下,，快準(zhǔn)備好你的小本本吧。

與傳統(tǒng)的純化方法（如蒸餾,、萃?。┍容^，制備液相是一種更有效的分離方法，因此被廣泛應(yīng)用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上,。隨著合成,、植化、生化和制藥等領(lǐng)域?qū)Ω呒兌冉M份的需求不斷增加,，制備型液相色譜儀應(yīng)用的領(lǐng)域也在迅速的擴(kuò)大發(fā)展,。

制備液相與分析液相的區(qū)別

和制備液相對應(yīng)的，是分析液相,。它們的最大差別,，不在于外形，而在于目的,。分析液相的目的當(dāng)然是為了分析樣品,，有什么成分，含量多少,，也叫做定性定量,。要做好分析液相，最關(guān)注的是分離度和靈敏度,，要分得開,，測得到，測得準(zhǔn),。而制備液相是利用色譜柱的分離能力,，來去除雜質(zhì)，得到高純樣品,。為什么強(qiáng)調(diào)純度呢？
在實驗室里,，紅外,、紫外、核磁這些儀器,，都要求樣品達(dá)到足夠的純度,，才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。除了實驗室,，藥品的生產(chǎn)也需要純化,，特別是生物制品和藥劑。很多生物制品如果是直接吃下去,，跟吃個雞蛋也沒什么不同,，直接注射才能保留活性成份。而注射治療,，藥物會直接進(jìn)入血液,，所以純度非常重要。在實驗室里，用于制備的液相,，配置和普通的分析液相差不多,。有泵，有進(jìn)樣器,，有柱子,，有檢測器。為了收集分離出來的化合物,，制備液相通常還配一個餾分收集器,。餾分收集器就像液相色譜的收納盒，把每次分析的同類物質(zhì)收納到一起,。餾分收集器可以直接串聯(lián)在檢測器后面,。也可以連接一個三通，和檢測器并聯(lián),，都接在色譜柱的后面,。有些實驗室里需要收集的量很大，一個餾分收集器裝不完,，還可以并聯(lián)好幾個,。根據(jù)檢測器的信號顯示，當(dāng)化合物出峰的時候,，儀器會自動收集,。一般按照時間編程，也可以根據(jù)檢測器的信號強(qiáng)度自動觸發(fā),。一個個化合物通過餾分收集器收集到小瓶或者試管里,，也可以通過管路連接到更大的瓶子。
制備液相有很多種分類方法,，比如按壓力分類,，或者按產(chǎn)量分類，彼此之間有交叉,，沒有明確的標(biāo)準(zhǔn),。不同類型的制備液相有著不同的特點。比如這根用在生產(chǎn)上的制備液相柱,，模樣和實驗室里有些不同,。僅僅內(nèi)徑就有1.6m，色譜柱的重量有36噸重,，每天消耗的流動相能放滿半個小游泳池,。除了特別大的，還有特別小的,。比如微克級制備,，也常被稱為微量制備，它的有趣之處在于微量餾分收集器，可以直接使用MALDI點樣板,。

制備色譜柱的材質(zhì)及其特點

各種規(guī)格的玻璃柱子在實驗室里頭很容易得到,，而且價格低廉，但玻璃柱子致命的弱點是它能承受的壓力很小,，且非常容易破碎,。當(dāng)由于壓力太小而導(dǎo)致流動相流速很慢的時候，高位液面或加高壓空氣（或者氮氣）的采用是一個簡單的解決辦法,。在底下加真空,，也能在一定程度上解決這個問題。
不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕,、抗壓力性能,，但其價格相對很貴。如果,，只有很小的分離項目且經(jīng)費(fèi)也允許,，選擇市面上直徑為1cm的小型制備柱。有機(jī)玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕,，相對不銹鋼柱子而言,，它是半透明的，可以看到液體的運(yùn)行狀態(tài),，對有色的物質(zhì)其特點就更為突出,。

裝柱方法的選擇

根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法,，往往裝填越好分離效果越好,。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大，顆粒度的減少會導(dǎo)致裝柱的難度,。一般來說,，顆粒直徑小于20－30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊－裝填"技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相,。濕法的目的是迫使相對稀松的 固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,，從而減少空隙的形成,。然而,，當(dāng)柱直徑大于20mm，所加壓力為30－40bar時,，高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復(fù)雜,。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱，可采用柱長壓縮技術(shù),。這種方法,，先將固定相懸漿（或偶爾是干填充物）裝入柱中加壓，利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種：徑向壓縮和軸向壓縮,。濕法裝柱需要一定的設(shè)備,，在柱子填完后，應(yīng)用有柱效的測量,，對柱效低的柱子應(yīng)該重填,。

流動相的選擇

除了和分析色譜同樣的考慮外，在選用流動相時,，要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作,。一般來說，不宜采用高毒性溶劑,，對多元溶劑要盡可能的少用,。如果產(chǎn)品中含有大量溶劑，溶劑的純度也要考慮在其中,。

組分保留時間的估計

用分析柱子在同等色譜條件下（同樣的固定相和流動相）測定保留時間后,，按照單一組分的線流速（不是體積流速）一定，通過計算可以知道組分的大致保留時間區(qū)域,。分析譜圖的峰形狀,，對確定保留時間也有很大的參考價值。

產(chǎn)品的收集

手工餾分收集費(fèi)時費(fèi)力,，自動餾分收集器有很大的方便,。許多實驗室和工廠都采用了餾分收集器。

超載,、邊緣切割,、中心切割、放大技術(shù)與非線性效用

在制備色譜中,，因為沒有必要達(dá)到分析色譜那樣的分離度,，可以在一定范圍內(nèi)大大加大進(jìn)樣的濃度和體積。在做分離的時候,，也有一些分析色譜的時候,，不能用到的技巧。因為篇幅關(guān)系,，不在這里敘述,。

柱轉(zhuǎn)換技術(shù)

通過接頭或者閥門，實現(xiàn)柱子的簡單延長,，或者比較方便地實現(xiàn)對其中一個（或幾個）組分的精制,。

新制備技術(shù)

模擬移動床可以連續(xù)進(jìn)樣，并可以利用邊緣切割效用,，而且采用了柱切換技術(shù),，能更好的利用溶劑和填料,，已經(jīng)應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。其理論和技術(shù)也日益完善,。迎頭色譜,、超臨界流體色譜、逆流色譜環(huán)形色譜,、氣相制備色譜等在科研和工業(yè)生產(chǎn)中也得到了應(yīng)用,。