液相色譜對于多數(shù)藥研人來說是很好上手的儀器,，但是就算是用過幾年、經(jīng)驗(yàn)豐富的分析員也會習(xí)慣于一些錯(cuò)誤的操作，導(dǎo)致挺貴的機(jī)器沒用幾次就壞了,。

簡化分析過程固然重要,，但是為了省時(shí)間而忽略了一些步驟，損壞了實(shí)驗(yàn)室物資遭到前輩的無情diss,，就得不償失了（尤其是借來的儀器,，就更應(yīng)該愛惜）。

流動相不過濾

因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞,、密封環(huán)、缸體和單向閥,，因此應(yīng)預(yù)先除去流動相中的任何固體微粒,。流動相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過,，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器,。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換,。

液相色譜儀使用后不及時(shí)清洗泵

流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì),，含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時(shí)間的情況下,。如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi),，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置,，就可能析出鹽的微細(xì)晶體,，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。

因此,，必須泵入純水將泵充分清洗后,，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）,。

流動相走空

泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完,，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán),，最終產(chǎn)生漏液,。

沒有流動相流出，又無壓力指示怎么辦,？

可能是泵內(nèi)有大量氣體,，這時(shí)可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn),，將氣泡排盡,，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換,。

液相色譜儀壓力和流量不穩(wěn)了,？

原因可能是氣泡，需要排除,；或者是單向閥內(nèi)有異物,，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗,。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡,，或被鹽的微細(xì)晶粒或滋生的微生物部分堵塞,，這時(shí),，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物,，或?qū)Ⅺ}溶解,，再立即清洗。

液相色譜儀壓力為啥過高或過低,？

 可能是是管路被堵塞,，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏,。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行,。在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合,，而且組成不斷變化,，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：

 PS：在液相色譜中對組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法,。在同一個(gè)分析周期中,，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫,。從而可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的,。(梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期；2.提高分離能力,；3.峰型得到改善,，很少拖尾；4.增加靈敏度,。但有時(shí)引起基線漂移,。）

梯度洗脫的流動相選擇不當(dāng)

要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相,。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意,。

 當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí),，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心,。

 液相色譜儀忽略的空白梯度洗脫

梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高,，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫,，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰,，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強(qiáng)溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需*脫氣,，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡,。