1.什么是熒光?
物體經(jīng)過較短波長(zhǎng)的光照,,把能量?jī)?chǔ)存起來,,然后緩慢發(fā)出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的光,發(fā)出的這種光就叫熒光,。物質(zhì)在吸收入射光的過程中,,光子能量傳遞給物質(zhì)分子。分子被激發(fā),,電子從較低能級(jí)躍遷到較高能級(jí),,形成電子激發(fā)態(tài)分子。電子的激發(fā)態(tài)的多重態(tài)用2s+1表示,,s為自旋角動(dòng)量量子數(shù)的代數(shù)和,,數(shù)值為0或1。分子中同一軌道里所占據(jù)的兩個(gè)電子必須具有相反的自旋方向,,即自旋配對(duì),。分子中全部電子都自旋配對(duì),即s=0,,該分子處于單重態(tài),,用S表示。若分子吸收能量后電子躍遷過程中不發(fā)生自旋方向的變化,,這時(shí)分子處于激發(fā)的單重態(tài),;若躍遷伴隨自旋方向改變,這時(shí)分子具有兩個(gè)自旋不配對(duì)的電子,,即s=1,,分子處于激發(fā)的三重態(tài),符號(hào)T表示,。符號(hào)S0,、S1和S2分別表示分子的基態(tài)、第一和第二電子激發(fā)單重態(tài),,T1和T2則分別表示第一和第二電子激發(fā)三重態(tài),。
激發(fā)態(tài)的分子不穩(wěn)定,可以通過輻射躍遷(熒光,、磷光)和非輻射躍遷(振動(dòng)弛豫,、內(nèi)轉(zhuǎn)換、外轉(zhuǎn)換,、系間竄越)的失活過程返回基態(tài),。熒光是分子從第一激發(fā)單重態(tài)的振動(dòng)能級(jí)躍遷到基態(tài)各振動(dòng)能級(jí)時(shí)所產(chǎn)生的光子輻射,熒光輻射能比激發(fā)能量低,熒光波長(zhǎng)大于激發(fā)波長(zhǎng),。熒光發(fā)射時(shí)間為10-9~10-7s,,多為S1→S0躍遷。磷光是分子從第一激發(fā)三重態(tài)的振動(dòng)能級(jí)躍遷到基態(tài)各振動(dòng)能級(jí)時(shí)所產(chǎn)生的光子輻射,,磷光輻射能比熒光輻射能量低,,磷光波長(zhǎng)大于熒光波長(zhǎng)。磷光發(fā)射時(shí)間為10-4~10s,,多為T1→S0躍遷,。
2.什么是熒光光譜?
任何熒光化合物都具有兩個(gè)特征光譜:激發(fā)光譜和發(fā)射光譜,。激發(fā)光譜反映了某一固定的發(fā)射波長(zhǎng)下所測(cè)量的熒光強(qiáng)度對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)的依賴關(guān)系,;發(fā)射光譜反映了某一固定激發(fā)波長(zhǎng)下所測(cè)量的熒光的波長(zhǎng)分布。
熒光光譜能夠提供激發(fā)譜,、發(fā)射譜,、峰位、峰強(qiáng)度,、量子產(chǎn)率,、熒光壽命、熒光偏振度等信息,,熒光分析定性和定量的基礎(chǔ),。
熒光光譜的特點(diǎn):(1)Stokes位移。激發(fā)光譜與發(fā)射光譜之間有波長(zhǎng)差,,發(fā)射光譜波長(zhǎng)比激發(fā)光譜波長(zhǎng)長(zhǎng),;(2)發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān);(3)鏡像規(guī)則,,熒光發(fā)射光譜與它的吸收光譜成鏡像對(duì)稱關(guān)系,。
3.什么是熒光分析?
熒光分析就是基于物質(zhì)的光致發(fā)光現(xiàn)象而產(chǎn)生的熒光的特性及其強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)的定性和定量的分析方法,。目前,,也廣泛地作為一種表征技術(shù)來研究體系的物理、化學(xué)性質(zhì)及其變化情況,,例如生物大分子構(gòu)象及性質(zhì)的研究,。
熒光光譜適用于固體粉末、晶體,、薄膜,、液體等樣品的分析。根據(jù)樣品分別選配石英池(液體樣品)或固體樣品架(粉末或片狀樣品),。
熒光光譜分析可與顯微鏡耦合,獲得微區(qū)分析結(jié)果,。熒光是無損傷,、非接觸的分析技術(shù),,還可用于自動(dòng)檢驗(yàn)、批量篩分,、遠(yuǎn)程原位分析和活體分析,。
熒光光譜已應(yīng)用于很多不同領(lǐng)域,特別是需要無損,、顯微,、化學(xué)分析、成像分析的場(chǎng)合,。無論是需要定性還是定量的數(shù)據(jù),,熒光分析都能快速、簡(jiǎn)便地提供重要信息,。