我經(jīng)常開玩笑說(shuō)，要保護(hù)色譜柱以得到最長(zhǎng)壽命的方法就是不要開封色譜柱,。一旦開始使用，色譜柱的壽命就逐漸衰減一直到用壞為止,。而影響色譜柱壽命的兩個(gè)主要因素是樣品中的雜質(zhì)和顆粒,，因此如果我們能夠在進(jìn)樣前去除樣品中的雜質(zhì)和顆粒，色譜柱的壽命一定會(huì)延長(zhǎng),。

前處理的方法包括固相萃?。⊿PE），液液萃取和其他的過(guò)濾方法,。簡(jiǎn)單地說(shuō),，如果在樣品進(jìn)入色譜柱前能大量減少其中的污染物，色譜柱的壽命一定會(huì)延長(zhǎng),，但是同時(shí)我們也必須考慮花在前處理的時(shí)間和費(fèi)用是否能得到合理的回報(bào),。如果目前使用的色譜柱已經(jīng)達(dá)到500針的進(jìn)樣量，而使用前處理所增加的時(shí)間和費(fèi)用,，如果需要將色譜柱的壽命由進(jìn)樣500針增加到2500針才劃得來(lái)的話,，就必須好好考慮是否前處理有其經(jīng)濟(jì)效益。但是如果進(jìn)血漿樣品,，不經(jīng)過(guò)前處理,，可能不到10針柱子就廢了,，這時(shí)候前處理就非常有必要了。但是除了經(jīng)濟(jì)效益以外,，對(duì)于使不使用前處理,，對(duì)色譜數(shù)據(jù)的優(yōu)劣也必須做一個(gè)比較。在我們實(shí)驗(yàn)室中,，這些前處理往往能夠讓我們即使在更低的濃度下也能收集到有效的數(shù)據(jù),，也能讓我們得到更一致的結(jié)果。

 不管有沒(méi)有使用前處理,，建議所有的樣品在進(jìn)樣前經(jīng)過(guò)過(guò)濾或是離心處理,。例如當(dāng)樣品經(jīng)過(guò)濾膜可以濾除顆粒從而減少堵塞色譜柱的篩板，濾膜的孔隙大小必須小于色譜柱的篩板孔徑大小,。一般大于3 μm顆粒的色譜柱使用2 μm大小的篩板,，3 μm顆粒的色譜柱則使用0.5 μm的篩板，而小于3 μm顆粒的色譜柱一般使用0.2 μm的篩板,，因此0.45 μm的濾膜基本可以用在除了亞2 μm顆粒以外所有的色譜柱,；對(duì)于亞2 μm顆粒的色譜柱，一般使用0.2 μm大小孔隙的濾膜,。大多濾膜是事先封裝好,，可以直接接在注射器進(jìn)行過(guò)濾或是作為96孔板的過(guò)濾板。

 雖然使用濾膜是有效果,，但是建議首先考量以下四點(diǎn)：

（1）濾膜并不便宜,，雖然每一片的單價(jià)并不是很貴，但是加起來(lái)的費(fèi)用就不便宜了,；

（2）過(guò)濾會(huì)花費(fèi)額外的時(shí)間,，使用0.5 μm濾膜過(guò)濾很慢，而使用0.2 μm濾膜就更慢了,；

（3）嚴(yán)格地講,，一旦過(guò)濾一個(gè)樣品，對(duì)其他樣品,，不管有沒(méi)有必要過(guò)濾,，都得過(guò)濾，以免出現(xiàn)不必要的變量干擾實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),；

（4）一旦使用過(guò)濾,，對(duì)方法開發(fā)進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，也必須驗(yàn)證過(guò)濾程序,。由于過(guò)濾過(guò)程往往會(huì)損失樣品,，因此我們需要確定是否存在不同成分損失程度不一致的情況，特別在高濃度和低濃度的時(shí)候,。

由于使用濾膜是費(fèi)時(shí)費(fèi)錢的工作,，因此每個(gè)實(shí)驗(yàn)室要先做評(píng)估是否值得,。但是不可否認(rèn)，使用濾膜過(guò)濾樣品在絕大多數(shù)的情形下是可以增長(zhǎng)色譜柱的壽命,。

 另外可以取代或是補(bǔ)充濾膜過(guò)濾的方法就是進(jìn)樣前使用離心處理樣品,。這是簡(jiǎn)單又經(jīng)濟(jì)的方法。離心后,，一些容易堵塞篩板的大顆粒會(huì)沉淀在離心管底部,，然后可以很簡(jiǎn)單取樣進(jìn)行分析。多年來(lái)我們一直使用這種方法在蛋白樣品的分析,，幾乎沒(méi)有發(fā)生過(guò)因?yàn)轭w粒堵塞色譜柱的問(wèn)題,。我曾經(jīng)有過(guò)在使用UHPLC時(shí)，雖然樣品經(jīng)過(guò)0.2 μm的濾膜過(guò)濾但是還是有些渾濁,，進(jìn)這種樣品而造成色譜柱堵塞的經(jīng)歷,，但是一旦渾濁的樣品經(jīng)過(guò)離心后，取不再渾濁的樣品進(jìn)樣,，色譜柱堵塞的問(wèn)題也解決了,。