色譜柱在使用前，最好進行柱的性能測試,，并將結(jié)果保存起來,，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動相,、柱溫等條件的差異而有所不同；另外,，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最佳條件),，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性,。

1,、樣品的前處理：

a、最好使用流動相溶解樣品。

b,、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。

c、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì),。

2,、色譜柱流動相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

a,、流動相對樣品具有一定的溶解能力,，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

b,、流動相具有一定惰性,，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

c,、流動相的黏度要盡量小,，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降,，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度),。

d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng),。如使用UV檢測器,，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

e,、流動相沸點不要太低,，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進行,。

f,、在流動相配制好后，一定要進行脫氣,。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3,、色譜柱流動相流速的選擇：

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,，要追求最佳柱效,，最好使用最佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,，流速一般選擇1ml/min,，對于內(nèi)徑為4.0mm柱,，流速0.8ml/min為佳。當(dāng)選用最佳流速時,，分析時間可能延長,。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量),。

注意：

a.由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外),。

b.對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用,。用水最好使用超純水(電阻率大于18兆歐),，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果,。

c.含水流動相最*在實驗前配制,，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。防止細菌生長,。

d.流動相要求使用0.45 µm濾膜過濾,，除去微粒雜質(zhì)。

e.使用HPLC級溶劑配制流動相,，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,，提高柱性能。