液相色譜儀是屬于易學難用的儀器，特別講究“正確使用”和經(jīng)驗,。液相工作者接觸最多的是流動相,，也就是流動相，是造成液相色譜各種問題的最主要源頭,。
液相色譜儀最常見的故障一是堵,，二是漏。下面就這兩點分別展開討論,。（注：流動相以甲醇為例,，色譜柱以C18為例）

“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢,。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端,，最主要原因就是流動相里有雜質，雜質的主要來源就是細菌,。 
01“堵”的原因：配制流動相時細菌污染
首先我們要認識到,，一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理,，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質,，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除,，真正容易引起問題的，是水中的細菌,。
新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌,，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙,，造成柱子很快報廢,。這就是在配制流動相時造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡單,，就是確保水的可靠性,。這里有兩種方式推薦：
（1）購買實驗室專用純水機，既方便又可靠,，質量也放心,。缺點就是價格不菲。
（2） 成箱購買市售品牌純凈水,，如500ml 一支的怡寶或娃哈哈,，這些水的質量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗,，待菌落數(shù)合格方可使用,。這樣每次只要單獨開一支即可，也很方便,。每次成本2 元左右,。
這里特別指出一個細節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動相都會談到最后有一個過濾的步驟,。但是從我們長期使用的實際效果來說,，只要能保證水的質量，這一步*可以也應當去除,。原因有以下幾點：
（1）流動相過濾在理論上有好處,，但是實際操作時由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染,，對于配比復雜的流動相影響更大,。
（2）流動相過濾在經(jīng)濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元,，且過濾器*是比較容易損壞的設備,。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元,。按一般液相柱的正常使用壽命計算,，過濾片的成本會遠遠高于色譜柱的成本,。
（3）流動相過濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預清洗,、裝備、使用,、用后清洗,，晾干的過程，至少也有一個小時的時間,。這個成本也不能忽視,。
（4）在實際工作未發(fā)現(xiàn)流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6 年時間沒有做過流動相過濾的工作,，但是和國內(nèi)同行相比較,，在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。 
02“堵”的原因：使用流動相時的細菌污染
指的是：流動相剛開始沒有長菌,，在使用時卻產(chǎn)生了細菌污染,。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。
舉例子：50％的甲醇水流動相,，有兩種使用方式,。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇,，流路B放純水,。從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點：首先是簡單,，不需要實驗者另個計算配比混合,，其次就是比例準確，能得到保留時間重復性好的實驗效果,。
但是,，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌（很多情況下不僅僅用純水作流動相,，而是用緩沖鹽溶液,，本身就是優(yōu)質肥料，細菌長得更迅速）,，一旦有細菌柱子就壞得很快,。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗后把水相換掉,，換成甲醇沖洗干凈,，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏,，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響,。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的,。
所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復性,，也不要用純水溶液作為流動相的一組,。從實際實驗效果來說，我建議用10％的甲醇水代替純水溶液（以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數(shù)實驗,，在5％就基本可以抑菌,，在10％及以上就可以*殺菌了），這樣可以有效排除長細菌的隱患,，既可作流動相,，也可沖柱。就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些,，但是一次麻煩,，終身受益。
03 "堵”的原因：不適當操作
常見問題的有以下幾種：
（1）在更換零件時選擇的型號有誤,，接口不是很匹配,，在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。
（2）樣品處理液凈化得不干凈,，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢,。
（3）在使用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因,，轉動的不到位,，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值,。
（4）在使用金屬管路作出廢液管時,，應當注意最好廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下,。如果位于在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液,，在停機時可能在出口端結晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見,，但卻的確發(fā)生過,。
“堵”的原因講了不少，現(xiàn)介紹查堵的方法,。
在發(fā)生“堵”的現(xiàn)象后,，就需要找出原因，主要是什么位置發(fā)生了“堵”,。注意,，絕大多數(shù)情況下，整個系統(tǒng)只會有一個地方發(fā)生堵塞。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開,，仔細觀察壓力數(shù)值,，如果某一個部件（柱子除外）裝上和拆下時的壓力差別很大，可發(fā)展變化判斷,。至于柱的堵塞,，可以通過換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來判斷。