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在高效液相色譜儀高效液相分析檢測樣品的過程中,色譜柱會受到來自于樣品及色譜系統(tǒng)的污染,,從而導(dǎo)致色譜柱耐用性差,、壽命縮短。
來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指,,HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒,,以及流動相系統(tǒng)過濾不*殘留的固體顆粒。來自于樣品的污染主要指,,未*溶解的樣品或者已*溶解的樣品進入色譜系統(tǒng)中,由于樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異,,導(dǎo)致沉淀析出污染系統(tǒng),。特別是對于中藥、天然產(chǎn)物,、合成中間體及生物藥品的檢測,,因基質(zhì)的復(fù)雜性,,色譜柱受污染的情況會更加嚴重。污染會導(dǎo)致液相色譜儀色譜系統(tǒng)壓力升高,、色譜柱塌陷,、填料變色等,從而帶來檢測成本高,,測試結(jié)果不準確等各種影響,。
以下幾種情況建議使用保護柱:
1.中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析——因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴重,,梯度洗脫時影響更大,。
2.生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染,保護柱可先于分析柱承受這種污染,,從而延長分析柱壽命,。
保護柱很重要,但選擇合適的保護柱更重要,,選擇或使用不當也可能帶來截然相反的效果,。
保護柱使用注意事項:
1.獨立式保護柱與分析柱連接時,連接管路盡可能短,,且接口切面平滑,,盡量減少死體積以降低柱外展寬效應(yīng)。
2.高效液相色譜儀卡套式保護柱一般未標注液流方向,,使用時*好自行標注,,并按照標注方向來使用,以免正反向使用后,,截留的雜質(zhì)污染分析柱,。
3.直接填裝的短柱型保護柱,出現(xiàn)柱壓升高或峰型變差時,,可不接分析柱進行反向清洗,,清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑。
4.卡套式保護柱,,柱芯替換時,,注意柱芯與柱套是否存在方向上的匹配,同時不易旋擰過緊,,以防滑絲,。
5.保護柱或柱芯一般不建議超聲清洗,因可能對填料表面修飾有影響,。
6.如同一保護柱配不同的分析柱使用,,每次使用前,保護柱需先清洗并用流動相平衡保護柱一段時間后,再接分析柱使用,。
高效液相色譜儀保護柱與柱前過濾器的區(qū)別和使用:
使用保護柱的目的在于延長分析柱的使用壽命,,當分析柱造價昂貴時,保護柱的價值尤其能體現(xiàn),,某些情況下,,當使用的分析柱本身價格便宜,保護柱并非必選,,推薦使用柱前過濾器更合適,。
柱前過濾器與保護柱兩者外形相似,差異主要在于:保護柱內(nèi)芯裝有填料,,而柱前過濾器內(nèi)芯是可更換的濾片(一般為帶孔的不銹鋼燒結(jié)板)
因此,,從結(jié)構(gòu)可以推測使用上的差異:
柱前過濾器——通用性強,任何分析柱前都可使用,,因其濾芯只起到過濾和截留雜質(zhì)的作用,,濾片污染后可超聲清洗,反復(fù)使用,。
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