液相色譜中的許多問題都能在譜圖上反映出來,，其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決,；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵,。而面對常常發(fā)現(xiàn)的HPLC 譜圖異常的問題,，如何做到真正解決問題，則需堅持這幾個原則：一具體問題具體對待原則; 二先外設(shè)后內(nèi)部原則;三由簡而繁原則; 四單一處理到綜全處理原則,。

一.拖尾峰

1.篩板阻塞:柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞,，樣品就會在篩板部分受阻而形成時間延遲，使得樣品在柱后流出時峰型形成拖尾,。需要通過反沖色譜柱,，或者更換篩板。

2.色譜柱塌陷:是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失,，不能對物質(zhì)形成保留,，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動相流出，但是又還有一點柱效,，因此形成拖尾,。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。

3.有污染:即樣品不在同一起跑線起跑,，從后面開始跑得到達終點稍晚,，表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機溶劑梯度洗脫1h以上,，以沖洗柱子,。

4.流動相PH值選擇錯誤:如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動態(tài)平衡，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會表現(xiàn)出拖尾,。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離,，改善拖尾，對于堿性化合物,，相對較低的PH值更有利于得到對稱峰,。

二.前沿峰

1.樣品過載:被保留的樣品在正常出峰時間前陸續(xù)出來，形成前沿峰,。降低樣品含量,。

2.樣品溶劑選擇不恰當(dāng):當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強于流動相時會出現(xiàn)前沿峰，例如,，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑,，而流動相的洗脫力較弱時會出現(xiàn)前沿峰,。選擇流動相或者接近流動相的比例作為樣品溶劑。

3.色譜柱損壞:色譜柱柱效損失,，不能對物質(zhì)形成保留,。更換色譜柱。

4.假象前沿峰:在大峰前有小峰出現(xiàn),假象前沿峰,，即大峰前包埋了沒有分開的小峰,。調(diào)整流動相洗脫梯度。

三.基線漂移

1.柱溫波動:即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動,，通常影響示差檢測器,、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器,。使用柱溫箱,，控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器,。

2.流動相不均勻:流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移,。使用HPLC級的溶劑，流動相在使用前進行脫氣處理,。

3.流通池被污染或有氣體:用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池,。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）,。

4.流動相配比不當(dāng)或流速變化:更改配比或流速,，為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。

5.樣品中有強保留的物質(zhì):以饅頭峰樣被洗脫出,，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線,。使用保護柱，如有必要,，在進樣之間或在分析過程中,，定期用強溶劑沖洗柱子。

四.出現(xiàn)寬峰

1.塔板數(shù)降低:色譜柱污染或失效,，造成塔板數(shù)降低,。更換同樣類型的色譜柱，如果新柱子可以提供對稱的色譜峰,，則用強溶劑沖洗舊柱子,。

2.管路太長或管路內(nèi)徑太大:柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大,。更換內(nèi)徑較小的短管路,。

3.檢測器響應(yīng)過大:檢測器對反應(yīng)時間或池體積響應(yīng)過大。減少響應(yīng)時間或使用更小的流通池,。

五.基線噪音

1.尖銳峰:在流動相,、檢測器或泵中有空氣,。流動相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣,。

2.漏液:檢查管路接頭是否松動,，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音,。如有必要,，更換泵密封。

3.流動相混合不*:用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑,。

4.溫度影響:柱溫過高,，檢測器未加熱。使用柱溫箱,，減少溫度差異或加上熱交換器,。

5.偶然噪聲:在同一條線上有其他電子設(shè)備，斷開LC,、檢測器和記錄儀,，檢查干擾是否來自于外部，加以更正,。采用精密級穩(wěn)壓電源,。

六.分離度不夠

1.流動相梯度洗脫設(shè)置不合理:優(yōu)化梯度洗脫程序。

2.流動相污染或變質(zhì):引起保留時間變化,，重新配置流動相,。

3.保護柱或分析柱阻塞:去掉保護柱進行分析，如果必要則更換保護柱,；如果分析柱阻塞,，可進行反沖；如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞,，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?；如果問題仍然存在，進口可能阻塞了,，更換入口處的篩板或更換色譜柱,。