液相色譜中的許多問(wèn)題都能在譜圖上反映出來(lái)，其中有一些問(wèn)題可以通過(guò)改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決,；而其他的問(wèn)題必須通過(guò)修改操作程序來(lái)解決,。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。而面對(duì)常常發(fā)現(xiàn)的HPLC 譜圖異常的問(wèn)題,，如何做到真正解決問(wèn)題,，則需堅(jiān)持這幾個(gè)原則：一具體問(wèn)題具體對(duì)待原則; 二先外設(shè)后內(nèi)部原則;三由簡(jiǎn)而繁原則; 四單一處理到綜全處理原則。

一.拖尾峰

1.篩板阻塞:柱子兩頭的過(guò)濾篩板如果堵塞,，樣品就會(huì)在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲,，使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。需要通過(guò)反沖色譜柱,，或者更換篩板,。

2.色譜柱塌陷:是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留,，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出,，但是又還有一點(diǎn)柱效，因此形成拖尾,。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱,。

3.有污染:即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開(kāi)始跑得到達(dá)終點(diǎn)稍晚，表現(xiàn)出拖尾,。更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上,，以沖洗柱子。

4.流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤:如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡,，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會(huì)表現(xiàn)出拖尾,。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾,，對(duì)于堿性化合物,，相對(duì)較低的PH值更有利于得到對(duì)稱峰。

二.前沿峰

1.樣品過(guò)載:被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來(lái),，形成前沿峰,。降低樣品含量。

2.樣品溶劑選擇不恰當(dāng):當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰,，例如,，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰,。選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑,。

3.色譜柱損壞:色譜柱柱效損失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留,。更換色譜柱,。

4.假象前沿峰:在大峰前有小峰出現(xiàn),假象前沿峰，即大峰前包埋了沒(méi)有分開(kāi)的小峰,。調(diào)整流動(dòng)相洗脫梯度。

三.基線漂移

1.柱溫波動(dòng):即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng),，通常影響示差檢測(cè)器,、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器,。使用柱溫箱,，控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器,。

2.流動(dòng)相不均勻:流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移,。使用HPLC級(jí)的溶劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理,。

3.流通池被污染或有氣體:用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池,。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）,。

4.流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化:更改配比或流速,，為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。

5.樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì):以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線,。使用保護(hù)柱,，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中,，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子,。

四.出現(xiàn)寬峰

1.塔板數(shù)降低:色譜柱污染或失效，造成塔板數(shù)降低,。更換同樣類型的色譜柱,，如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子,。

2.管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大:柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大,。更換內(nèi)徑較小的短管路。

3.檢測(cè)器響應(yīng)過(guò)大:檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過(guò)大,。減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池,。

五.基線噪音

1.尖銳峰:在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣,。流動(dòng)相脫氣,，沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。

2.漏液:檢查管路接頭是否松動(dòng),，泵是否漏液,，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,，更換泵密封,。

3.流動(dòng)相混合不*:用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。

4.溫度影響:柱溫過(guò)高,，檢測(cè)器未加熱,。使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器,。

5.偶然噪聲:在同一條線上有其他電子設(shè)備,，斷開(kāi)LC、檢測(cè)器和記錄儀,，檢查干擾是否來(lái)自于外部,，加以更正。采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源,。

六.分離度不夠

1.流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理:優(yōu)化梯度洗脫程序,。

2.流動(dòng)相污染或變質(zhì):引起保留時(shí)間變化，重新配置流動(dòng)相,。

3.保護(hù)柱或分析柱阻塞:去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析,，如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱,；如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖,；如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颍蝗绻麊?wèn)題仍然存在,，進(jìn)口可能阻塞了,，更換入口處的篩板或更換色譜柱。