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高通量組織研磨儀在低溫破碎酵母細(xì)胞中的使用說(shuō)明
閱讀：3063 發(fā)布時(shí)間：2016-4-27條形酵母是將酵母通過(guò)小孔注入到裝有液體氮的氣罐中壓縮制成的,。將有1mm的篩子扣入到裝有10-20 ml球狀酵母的50ml破碎罐的頂部,，經(jīng)過(guò)離心破碎變成了2L的條狀物。壓力是由人工用60ml的自由活塞注射器注入罐內(nèi),，條狀可以在-80C°下被保存,。
使用上海凈信Tissuelyser全自動(dòng)樣品快速研磨儀對(duì)酵母進(jìn)行研磨，將不銹鋼鋼珠和樣本分別裝入研磨鋼罐中,，然后放入到用聚苯乙烯盒子盛放的液氮中,，當(dāng)預(yù)冷凍過(guò)程結(jié)束后，時(shí)間一分鐘左右,，或者直到原來(lái)沸騰的液體氮恢復(fù)平靜,，將破碎罐從液氮中取出，并要將破碎罐沾有的液體全部清理干凈,，以避免在破碎過(guò)程中發(fā)生爆炸,。研磨鋼罐用坩堝鉗或大鑷子夾取出來(lái)，而且通常要帶經(jīng)過(guò)冷凍的手套,，凍傷以免,。
研磨鋼罐中酵母量不要太多，否則可能會(huì)研磨不充分,，留有殘?jiān)?，一般為研磨鋼罐?/3左右為宜，把剛從液氮中取出的鋼罐安裝在凈信Tissuelyser全自動(dòng)樣本快速研磨儀中,，分5次進(jìn)行研磨,，設(shè)置頻率55hz，20s,，每次間隔都把研磨罐放入液氮中冷卻,。
在每次破碎后都要將破碎罐取下，放入到液氮中進(jìn)行冷凍,，當(dāng)液氮不在沸騰時(shí),，可以將鋼罐取出，破碎可以繼續(xù)進(jìn)行,。
經(jīng)過(guò)100秒的破碎后,，我們通過(guò)顯微鏡觀察可以發(fā)現(xiàn)95%的酵母已經(jīng)達(dá)到破碎效果，用于下一步的實(shí)驗(yàn)過(guò)程,。剩余的酵母可以儲(chǔ)存,，備用。
研磨鋼罐和鋼珠都可重復(fù)利用,，破碎罐和破碎球可以用溫的乙醇清洗,，放到干燥處貯存,。
