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ibidi活細(xì)胞培養(yǎng),，共聚焦成像
閱讀：1208 發(fā)布時(shí)間：2023-8-241.一體化小室——細(xì)胞培養(yǎng)&顯微成像兩用玻片/培養(yǎng)皿
細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)?zāi)窃趺醋龅模?/span>
還在用小玻片,，先泡酸,、再晾干、再coating,、再種細(xì)胞,、染色、最后封片成像,？
那您太out了吧,！
使用德國ibidi產(chǎn)品，先養(yǎng)細(xì)胞,、然后直接固定,、染色、成像,，在培養(yǎng)皿/玻片上全部搞定,！不僅能幫您把細(xì)胞養(yǎng)好、還能幫您省時(shí)省力的獲得漂亮的成像結(jié)果（見圖1）,！
圖1. 傳統(tǒng)爬片方法（左）與ibidi 產(chǎn)品免疫熒光實(shí)驗(yàn)（右）的比較
2.ibidi產(chǎn)品底部媲美蓋玻片厚度,，為高分辨率顯微成像而設(shè)計(jì)的光學(xué)特性
德國ibidi公司研發(fā)的μ-Slide與μ-Dish系列產(chǎn)品，與一般市面上常見的細(xì)胞培養(yǎng)皿不同,，其底部是由polymer塑料制成,，具有與玻璃材質(zhì)媲美的高光學(xué)穿透與低背景熒光等特性,。相較于一般細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品（圖2左），ibidi產(chǎn)品（圖2右）底部構(gòu)造厚度符合標(biāo)準(zhǔn)蓋玻片厚度（180 μm）,，用高倍鏡物鏡觀察,，可以使焦距集中在待測樣本上，產(chǎn)生良好的成像結(jié)果,。
圖2. ibidi細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品底部媲美蓋玻片厚度
3.ibidi產(chǎn)品底部化學(xué)耐受性強(qiáng),，適用于多種常用的細(xì)胞固定劑（見圖3）
圖3.ibidi產(chǎn)品底部適用的溶劑列表
4. 多種多樣的細(xì)胞培養(yǎng)表面
細(xì)胞進(jìn)行生長、發(fā)育和信號傳遞很大程度上取決于細(xì)胞容器的表面處理方式,。
ibidi 產(chǎn)品底部相比于普通培養(yǎng)皿更加平滑（見圖4）,。目前，ibidi產(chǎn)品μ-Slides和μ-Dishes有標(biāo)準(zhǔn)底,、玻璃底以及多種底部預(yù)包被的產(chǎn)品,，適用于培養(yǎng)不同的細(xì)胞類型，不同底之間的比較（見圖5）,。
ibidi標(biāo)準(zhǔn)底具有親水超薄的特性,，該底部的光學(xué)特性符合多種成像技術(shù)的要求，如相差,、共聚焦和雙光子顯微成像,。
ibiTreat，作為ibidi的表面處理方式,，通過了大量不同細(xì)胞系和原代細(xì)胞培養(yǎng)測試,，且已發(fā)表的30000多篇使用了ibidi產(chǎn)品的期刊論文中，超過90%使用了ibiTreat,，表明大多數(shù)細(xì)胞在ibiTreat下生長良好,，無需進(jìn)行額外的表面處理。ibiTreat是一種物理修飾的表面處理方式,，讓耗材表面親水,，利于絕大多數(shù)種類的細(xì)胞貼壁，可與其他標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿相媲美,。
圖4. AFM（原子力顯微技術(shù)）測量表面粗糙度,。ibidi產(chǎn)品（右下）比普通培養(yǎng)皿具有更平滑的底部構(gòu)造，更加的成像效果,。
ibidi標(biāo)準(zhǔn)底也有疏水,、無包被的表面可以選擇?？梢愿鶕?jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求，進(jìn)行特定的包被,，或者直接用來培養(yǎng)非貼壁細(xì)胞,。
ibidi也有玻璃底的產(chǎn)品,。玻璃底可以直接培養(yǎng)細(xì)胞，但可能需要進(jìn)行表面處理來促進(jìn)細(xì)胞更好的貼壁,。ibidi研發(fā)的玻璃底產(chǎn)品尤其適用于TIRF,、單光子及單分子應(yīng)用。
圖5. ibidi標(biāo)準(zhǔn)底與ibidi玻璃底
基于以上特殊的底部構(gòu)造,，ibidi μ-Dish,，μ-Slide以及μ-plate等產(chǎn)品都既適用于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)，又可以簡化免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟,、節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間,，并且獲得顯微成像效果。
ibidi μ-Dishes產(chǎn)品可以進(jìn)行常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng),、轉(zhuǎn)染,、免疫熒光實(shí)驗(yàn)以及高分辨率顯微成像。目前ibidi μ-Dishes主要包括35mm（高壁和低壁）（見圖6）,。35mm低壁的產(chǎn)品更適合于在顯微鏡下對細(xì)胞進(jìn)行操作,，如進(jìn)行電生理膜片鉗記錄細(xì)胞，或者吸取單細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞基因組測序等實(shí)驗(yàn),。
圖6. ibidi μ-Dish系列產(chǎn)品：35mm高壁VS低壁
ibidi μ-Dishes另外一個(gè)精巧的設(shè)計(jì)是帶鎖的蓋子（見圖7）,。當(dāng)蓋子處于lock位置，減小蒸發(fā)的影響,，因而可以在非濕潤環(huán)境中進(jìn)行長時(shí)程的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),，如需要在培養(yǎng)箱外，顯微鏡下進(jìn)行長時(shí)程的活細(xì)胞觀察實(shí)驗(yàn),。由于Dish特殊的氣體通透特性,，在細(xì)胞培養(yǎng)期間氣體交換（C02，O2）是并不受lock位置影響的,。
圖7.帶鎖的培養(yǎng)皿設(shè)計(jì)
μ-Slides well系列產(chǎn)品：μ-Slides 2 well,，4 well，8well
如果您希望同時(shí)獲得多個(gè)樣品的顯微成像結(jié)果,，如比較同種細(xì)胞加入不同藥物刺激的形態(tài)變化,，或者實(shí)驗(yàn)初期用來篩選好用的抗體及摸索最佳抗體濃度等實(shí)驗(yàn)，推薦使用μ-Slides well系列產(chǎn)品（見圖8）,。不同大小的開放小室適用于不同量的細(xì)胞培養(yǎng),。其底部也是ibidi標(biāo)準(zhǔn)底處理，滿足細(xì)胞培養(yǎng),、免疫熒光實(shí)驗(yàn),、高分辨率顯微成像的需求。
圖8. μ-Slides well系列產(chǎn)品：μ-Slides 2 well，4 well,，8well,，18well
在此基礎(chǔ)上，如果需要進(jìn)行更佳的顯微鏡成像實(shí)驗(yàn),，如進(jìn)行實(shí)時(shí)的活細(xì)胞不同位點(diǎn)的掃描,，μ-Slides well ph+系列產(chǎn)品更適合您。在傳統(tǒng)的μ-Slides well的孔的中間,，ph+產(chǎn)品加了一層特殊的平板（見圖9）,，這層平板可以有效避免開放小室中影響相差成像效果的凹液面的形成。在這層平板與well的四周有縫隙,，方便向其中加入細(xì)胞及換液等操作,。
圖9. μ-Slides well 與 μ-Slides well ph+ 產(chǎn)品以及成像對比圖。左圖. 產(chǎn)品對比圖,，ph+在中間有特殊的平板,，四周有孔洞，方便鋪細(xì)胞及換液等操作,。右圖. ph+有效防止凹液面形成（右側(cè)）,，整個(gè)視野都有良好的相差成像效果。
以上產(chǎn)品還有底部帶網(wǎng)格的（見圖10）,，如35 mm Dish Grid-500 & Grid-50，μ-Slides 8 well Grid-500,?？蓱?yīng)用于細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)的重定位，特定區(qū)域發(fā)生事件的數(shù)目如細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的統(tǒng)計(jì),，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)距離的參考,，對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行顯微注射或者追蹤軸突的生長等。同樣這些產(chǎn)品具備ibidi標(biāo)準(zhǔn)底設(shè)計(jì),，適用于高分辨率的顯微成像,。
圖10. 帶網(wǎng)格產(chǎn)品的底部網(wǎng)格圖示
一體化小室產(chǎn)品還包括μ-Slide channel 系列產(chǎn)品（圖11A），這類產(chǎn)品有通道式的細(xì)胞培養(yǎng)空間,，同樣具有ibidi標(biāo)準(zhǔn)底,，適合于高分辨率顯微成像。產(chǎn)品兩端有魯爾接頭,，可應(yīng)用于流體剪切力實(shí)驗(yàn),，即在培養(yǎng)基流動(dòng)狀態(tài)下就行細(xì)胞培養(yǎng)。
在開放小室中鋪細(xì)胞時(shí),，通常依賴于人為晃動(dòng)操作,，對于新手尤其容易使細(xì)胞聚團(tuán),，導(dǎo)致細(xì)胞分布不均（圖11C）。而通道式的設(shè)計(jì),，巧妙回避這一問題,，只需要向通道中加入細(xì)胞懸液，無需晃動(dòng)（圖11B）,，輕松使細(xì)胞在通道中均勻分布（圖11D）。另外當(dāng)需要進(jìn)行精確的少量試劑換液時(shí),，或者試劑,、抗體珍貴，μ-Slide channel 系列產(chǎn)品將是好的選擇,。
圖11. μ-Slide channel 系列產(chǎn)品,。A. μ-Slide I及μ-Slide IV產(chǎn)品圖示。B. μ-Slide I為例說明系列產(chǎn)品適用步驟,，向通道中加入100 ul細(xì)胞懸液,，向一側(cè)儲液池中加入無細(xì)胞的培養(yǎng)液，向另一側(cè)儲液池中加入無細(xì)胞的培養(yǎng)液,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。C. 開放小室的細(xì)胞分布，依賴于晃動(dòng)操作,，經(jīng)常會分布不均勻,。D. channel中細(xì)胞的分布，由于其集合設(shè)計(jì),，使細(xì)胞非常容易的均勻分布在通道中,。
考慮到有些用戶希望保存標(biāo)本，ibidi公司還開發(fā)了removable的硅膠培養(yǎng)室（圖12左）,，用于細(xì)胞培養(yǎng)和顯微成像,。將硅膠材料移除后，可以封片進(jìn)行保存,。
另外,，ibidi公司還開發(fā)了Sticky的well及通道（圖12右）。這類產(chǎn)品通用性強(qiáng),，可與多種多樣的底部材料粘貼,。而且對于不易放入通道培養(yǎng)的細(xì)胞、組織等,，可以選擇先放在底部材料上,，再將培養(yǎng)通道粘貼到其上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
圖12. Removable & Sticky系列產(chǎn)品,。圖左. 3/8/12 Well Chamber, removable,；圖右. sticky-Slide 8 well、sticky-Slide I Luer、sticky-Slide VI 0.4,。
易必迪ibidi公司專注于細(xì)胞培養(yǎng)及功能實(shí)驗(yàn)的耗材及儀器開發(fā),，產(chǎn)品設(shè)計(jì)巧妙，適用于各種各樣的實(shí)驗(yàn)需求,，簡化實(shí)驗(yàn)步驟,，節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。如果您也在培養(yǎng)細(xì)胞,，也在做細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn),，也在做細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)，那么快來試試ibidi系列產(chǎn)品吧,，絕對讓您實(shí)驗(yàn)變得輕松簡單,，事半功倍！