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組織研磨機對提取動物關節(jié)軟骨組織總RNA
閱讀：2923 發(fā)布時間：2017-1-6組織研磨機對提取動物關節(jié)軟骨組織總RNA
實驗目的
研磨破碎軟骨組織（大鼠膝關節(jié)軟骨）,，提取其總RNA。
實驗原理
充分磨碎軟骨樣品（大鼠膝關節(jié)軟骨）,，再用相關試劑提取其總RNA。
實驗材料和器具
樣品：大鼠膝關節(jié)軟骨
儀器：多樣品組織研磨儀（上海凈信，Tissuelyser-24）
耗材：研磨罐（上海凈信,，1研磨單位），研磨珠（上海凈信,，8號研磨珠,，1顆）
試劑：液氮若干
實驗步驟
1.研磨軟骨組織
1.1 取適量大鼠膝關節(jié)軟骨組織,，剪切成約1立方厘米小塊；
1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中2分鐘或放入-80度冰箱冷凍30分鐘,；
1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中,，蓋好蓋子；
1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管,，放入已經(jīng)在-20度冰箱預冷好的適配器中,，加入變性液，β-巰基乙醇,；
1.5 將適配器放入凈信研磨儀中,，在14單位頻振條件下，研磨1min,，可得到勻漿狀的軟骨組織,；
2.總RNA提取
2.1 冰水浴下，加酸性水飽和酚,，搖勻,，加醋酸鈉，氯fang,、異戊醇混合液,，冰水浴上15min；
2.2 4℃下,，離心,，取上清液，加氯fang,、異戊醇混合液,，離心取上清，加異丙醇,，-20℃下沉淀,，離心，得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀,，加無RNA酶水,，溶解得膠狀溶液；
2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀,，取沉淀,，乙醇洗滌后用無RNA酶水溶解沉淀，即得關節(jié)軟骨組織總RNA溶液,。
實驗結(jié)果
采用本實驗方法提取的動物關節(jié)軟骨組織總RNA的收率高,，并且純度高、質(zhì)量,、完整性好,，可以滿足分子生物學研究應用,。
總RNA甲醛變性膠電泳結(jié)果
Ⅱ型膠原PCR擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果
參考文獻：
［1］劉玉剛等，一種富含多糖的關節(jié)軟骨組織總RNA提取方法初探,，第三軍醫(yī)大學學報：2009年24期,。