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組織研磨機對提取小鼠尾巴RNA的實驗步驟
閱讀：2240 發(fā)布時間：2016-12-30組織研磨機對提取小鼠尾巴RNA的實驗步驟
實驗步驟
1,、首先將上海凈信的組織研磨機上的制冷模塊預先置于-20℃，使用時取出安裝好,。將研磨珠去RNA酶處理,。
2、隨機抽取小鼠的尾巴100µg,，把樣本剪成盡可能小段,，置于無RNA酶的2研磨單位離心管中（選擇耐液氮冷凍管子），同時加入1顆5號研磨珠和2顆3號研磨珠（如果選擇1.5研磨單位離心管,，只需要加入4-5顆3號研磨珠）,。
3、放置于液氮中一起浸泡3分鐘,，取出放置于預冷模塊中,，在全自動樣品研磨儀上選擇13單位頻振研磨60s。（該步驟可以根據(jù)研磨的細微程度要求可以再重復一遍）
4,、把研磨好的樣本加入0.06ml的PBS0.14ml的RNAiso Plus（此處選擇PBS,，可以根據(jù)實驗需要加入其他提取液，如1ml TRIzol等）,，繼續(xù)置于研磨機上選擇13單位頻振研磨60s,。樣本將處于糊狀,。（其他提取試劑有可能會出現(xiàn)泡沫，不影響實驗）
5,、取出研磨管,，放入冷凍離心機中，于4度,，12000g離心10分鐘
6,、小心吸取上清液0.1ml至新的1.5研磨單位離心管中，蓋上管蓋,，在室溫上孵育15分種,，使樣品充分裂解至勻漿液較透明，如果仍有少量顆粒屬于正常情況,，不影響RNA提取質量和得率,。
7、在1.5研磨單位離心管中加入0.02ml氯（空）仿,，蓋緊管蓋,，振蕩混勻并將其在冰上孵育15分種，于4度,，12000g離心15分鐘,。離心后混合物分層：上清層，中間層,，下層,；RNA存在于上清層中。
8,、將上清層小心轉移到一干凈的離心管中,，加入等體積冰浴的異丙醇，顛倒振蕩混勻,，將混合的樣品在-20度條件,，孵育20分種，于4度,，12000g離心10分鐘,。RNA沉淀通常形成片狀沉淀附著于管壁或管底。
小心棄去上清,，用1ML的冰浴75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次,，顛倒洗滌離心管管壁，并旋渦振蕩樣品,，盡可能讓沉懸浮,，于4度，12000g離心5分鐘,，再次去除上清,，晾干沉淀,。
10、操作的zui后,，在陰涼處適度干燥RNA沉淀（避免過分干燥,，那樣會降底它的可溶性）。
11,、用適量（一般可用0.01—0.02ml）的無RNA酶水或TE溶液來溶解RNA,。抽提好的RNA，保存于-70度,。