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組織研磨機(jī)對(duì)土壤微生物基因組DNA的抽提
閱讀：2422 發(fā)布時(shí)間：2016-12-29組織研磨機(jī)對(duì)土壤微生物基因組DNA的抽提
（還可以提取如沉積物,，排泄物，廢水,，雪水等樣品的DNA）土壤微生物基因組DNA抽提試劑盒/提取試劑盒
（利用硅吸附DNA原理）
一,，說(shuō)明
本試劑盒可以在30分鐘內(nèi)快速有效的直接從土壤分離微生物基因組DNA。用上海凈信科技（全自動(dòng)樣品快速勻漿機(jī)）FSTPRP儀器（將樣品與緩沖液加入帶有特殊小珠的樣品管/離心管）在40秒內(nèi)可以裂解土壤中的植物,、動(dòng)物組織,、細(xì)菌、藻類,、真菌孢子,、酵母、線蟲(chóng),。經(jīng)過(guò)本試劑盒的分離純化,，所得的DNA可以用于PCR、限制性酶切,、電泳和其他使用,。
濃縮SEWS-M使用前加入25ML無(wú)水乙醇，并在瓶子上做好標(biāo)記,，蓋好瓶蓋
WASH D使用前加入56ML無(wú)水乙醇,，并在瓶子上做好標(biāo)記，蓋好瓶蓋
用1ML ddH20（滅菌）*溶解RNA酶,，將RNA酶放入水中煮,，水沸后再煮沸20分種，并掉炎,，緩慢冷至室溫后,，將RNA酶取出,，全部加入 sodium phosphate buffer中,，充分混勻后，將sodium phosphate buffer buffer 放入4度保存,。
試劑盒組成
三,，步驟
加入500MG 土壤樣品到一個(gè)樣品管中，管中應(yīng)管有0.05-0.1ml 空間,。
（注意一,，為使樣品盡可能遙多均勻，一個(gè)樣品一般取四個(gè)管,，兩管并一管,，得到兩管的DNA，注意二,，在試驗(yàn)中,，可用普通離心管+氧化鋯珠（0.8g）,注意三,，應(yīng)將放在-20度的樣品上一天取出化凍）
加入0.1956ml sodium phosphate buffer 到樣品中
加入0.0244ml MT buffer 到樣品中
用上海凈信科技（全自動(dòng)樣品快速研磨機(jī)機(jī)）儀器以速度14單位頻振60S 反復(fù)三次（確保*可以粉碎）
13000rmp 離心5-10min ，沉淀碎片 （注意一,，加一步去除腐酸的步驟：取上清到10研磨單位離心管,，加入。,。,。。,。,。。,。,。。,。,。。顛倒混勻,，2MIN 12005MIN看不清）
將上清（約0.12ml）轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的2研磨單位離心管中,，加入0.05ml PPS到管中，用手顛倒混勻10次,。
13000RPM 離心5MIN 以沉淀蛋白質(zhì),，轉(zhuǎn)移上清到一個(gè)干凈的2研磨單位離心管中（約0.14ml）
加入1ML Binding solution b（5倍體積）到2研磨單位離心管中，用手顛倒混勻2MIN (提前水加熱,，促進(jìn)DNA與硅膠給合)
將結(jié)全柱放入2ML收集管中,，凈混合液加入結(jié)合柱中，室溫放置2 min.(分三次加,，每次加0.12-0.14ml兩管并一管)
13000RPM離心1MIN,，倒掉收集管中的廢液，將結(jié)合柱重新放入2研磨單位離心管中,。
加入0.1ml SEWS-M（Spin-buffer）到結(jié)合柱中,，13000RPM離心1MIN，倒掉收集管中的廢液,。
注去注腐殖酸
在1.5研磨單位離心管中制備腐殖酸洗滌溶液：
Sodium phosphate buffer 978UL
MT buffer 0.0244ml
Pps: 250ul
混勻,，13000RPM離心1分種轉(zhuǎn)移上清液于一個(gè)干凈的2研磨單位離心管中。
加入等體積的5M Guanidine Thiocyanate sojution 混勻,。
加入0.1ml 腐殖酸洗滌液到步聚11中的結(jié)合術(shù)中,，13000RPM離心1分種，倒掉收集管中廢液,。
重復(fù)上述步驟三次
接步驟十二
加入0.13mlwashD 于結(jié)合柱中,，13000RPM離心1MIN,，倒掉收集管中的廢液。
將結(jié)合柱裝入離心管中,，130000RMP離心2MIN
將結(jié)合柱裝入1.5研磨單位離心管中,。室溫放置五分種，以便乙醇揮發(fā)干凈,，在膜中央小心加入,，0.015ml DES 。不要戳破膜,，室溫放置2MIN,。（37度 30MIN）
13000RPM離心1MIN 離心管中即為分離的DNA，貯存于-20度或進(jìn)入下一步室實(shí)驗(yàn),。（應(yīng)將2管DNA混于一管,，混勻，再分成兩管,，這樣即能得到4管一管的目的,。目的是盡量消除樣品內(nèi)部差異）
本實(shí)驗(yàn)不用去除腐殖酸這一步，但有文獻(xiàn)指出,，在-20度時(shí),，腐殖酸仍會(huì)降解DNA，