本文隸屬于復(fù)雜制劑應(yīng)用專(zhuān)題,，全文共 2445字,，閱讀大約需要 8 分鐘

摘要：佐劑（Adjuvant）又稱(chēng)免疫調(diào)節(jié)劑或免疫增強(qiáng)劑（Immunepotentiator）,，是作為疫苗的一種添加劑,，當(dāng)它先于抗原或與抗原混合注入機(jī)體后，能夠增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答或者改變免疫反應(yīng)的類(lèi)型，屬于非特異性的免疫增強(qiáng)劑,，而其本身無(wú)抗原性。理想的佐劑不僅能夠增強(qiáng)免疫反應(yīng),，而且能使機(jī)體獲得最佳的保護(hù)性免疫,。乳佐的均一性和穩(wěn)定性是非常重要的兩個(gè)考察項(xiàng)，而與此直接相關(guān)的是粒度的控制^[1],。

最近發(fā)布在Nature的文章表明,，對(duì)MF59而言，平均粒徑在160nm（MF59）左右效果比較佳^[2],，粒徑過(guò)大及過(guò)小效果都欠佳,。此外，小顆粒濃度（如＜100nm）及大顆粒濃度（如＞1.2μm）過(guò)高均影響最后的藥效且?guī)?lái)副作用危害,。因此,，除對(duì)平均粒徑控制外，“過(guò)大",，“過(guò)小"顆粒濃度控制也非常重要,。值得注意的是，在實(shí)際應(yīng)用中,，產(chǎn)品穩(wěn)定性指標(biāo)是一個(gè)非常重要的考察項(xiàng),，用于快速篩選配方及優(yōu)化工藝。

關(guān)鍵詞：佐劑,；疫苗,；乳佐；平均粒徑,；顆粒濃度

乳佐的常規(guī)制備方法為：制備水相、油相,，經(jīng)過(guò)混合,、剪切步驟形成初乳，初乳經(jīng)微射流均質(zhì)機(jī)均質(zhì),，而后除菌過(guò)濾得到乳佐,。初乳、均質(zhì)后乳液,、除菌過(guò)濾后乳液通過(guò)PSS的Nicomp粒度分析儀測(cè)試平均粒徑,、AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器測(cè)試過(guò)大顆粒濃度、Lum穩(wěn)定性分析儀快速篩選乳佐配方穩(wěn)定性,。另通過(guò)Lumispoc檢測(cè)過(guò)小顆粒濃度,。

圖1 乳佐解決方案圖示

以MF59為例，國(guó)際廠家在其乳佐制備上,，對(duì)粒徑進(jìn)行嚴(yán)格控制,，控制初乳、微射流均質(zhì)后乳液,、除菌過(guò)濾后乳液的平均粒徑及大于1.2μm的油滴濃度^[2][3]。

PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī)（小試兼中試型）采用固定結(jié)構(gòu)的均質(zhì)腔,，通過(guò)電液傳動(dòng)的增壓器使物料在高壓作用下以極大的速度流經(jīng)交互容腔的微管通道,，物料流在此過(guò)程中受到高剪切力、高碰撞力,、空穴效應(yīng)等物理作用,，使得平均粒徑降低、體系均一穩(wěn)定,，由此獲得理想的均質(zhì),、分散或乳化結(jié)果。

圖2 高壓微射流均質(zhì)機(jī)器外觀

• 最高2069 bar的均質(zhì)壓力,，最高處理量20L/h （PSI-20）

• 采用特殊設(shè)計(jì)Y型腔,，去除尾端大顆粒效果佳，物料的混合更均一,，處理效率高

• 屏顯界面,，數(shù)據(jù)可溯源：支持?jǐn)?shù)據(jù)導(dǎo)出設(shè)定壓力及實(shí)時(shí)壓力、監(jiān)測(cè)點(diǎn)溫度,、實(shí)時(shí)流量,、時(shí)間等

• 配置K型熱電偶：可用于實(shí)施監(jiān)測(cè)料液溫度

• 低噪音：運(yùn)行音量低于70分貝，工作環(huán)境友好型

乳佐的粒度對(duì)其免疫效果起到很大的作用,，整體平均粒徑過(guò)大過(guò)小都不利于乳佐的免疫效果，以MF59為例,，一般平均粒徑在160nm 左右效果比較佳,。其平均粒徑不宜過(guò)大，相比于微米級(jí)別的液滴,，納米級(jí)別的乳佐更易于無(wú)菌過(guò)濾,，耐受性良好，比更大的微米級(jí)W/O乳液佐劑具有更好的免疫原性和穩(wěn)定性,。但平均粒徑過(guò)小,，則會(huì)降低其在肌肉中的停留時(shí)間，導(dǎo)致從注射部位排除更快地排除,，從而降低了藥物效果,，因?yàn)檩^小的顆粒比較大的顆粒更容易通過(guò)細(xì)胞內(nèi)間隙外滲,，并更快地到達(dá)淋巴結(jié)。因此,，平均粒徑需在合適范圍內(nèi),。

Nicomp系列納米激光粒度儀采用動(dòng)態(tài)光散射原理檢測(cè)分析樣品的粒度分布，基于多普勒電泳光散射原理檢測(cè)ZETA電位,。

圖五 微射流均質(zhì)原理圖

• 粒徑檢測(cè)范圍0.3nm-10μm,，ZETA電位檢測(cè)范圍為+/-500mV

• 搭載Nicomp多峰算法，可以實(shí)時(shí)切換成多峰分布觀察各部分的粒徑,。

• 高分辨率的納米檢測(cè),，Nicomp納米激光粒度儀對(duì)于小于10nm的粒子仍然現(xiàn)實(shí)較好的分辨率和準(zhǔn)確度。

圖4 高斯粒徑分布圖

圖5  多峰粒徑分布圖

乳佐常規(guī)的平均粒徑一般為亞微米級(jí)別或納米級(jí)別,，但是微米的乳粒往往大量存在，這些尾端大粒子的存在往往會(huì)吸附小顆粒,，影響乳佐的穩(wěn)定性,，分析尾端大粒子濃度和數(shù)量，可以評(píng)價(jià)當(dāng)前配方和工藝的情況并做出相應(yīng)的優(yōu)化,。USP729規(guī)定乳劑中大于5μm的乳粒(PFAT5)體積占比不得超過(guò)0.05%,，但目前還未有藥典對(duì)乳劑中的下限進(jìn)行規(guī)定，這并不意味著小粒子無(wú)需關(guān)注,。如果過(guò)小顆粒濃度過(guò)多,，如低于100nm，幾十納米左右,，那么注入體內(nèi)后可以穿過(guò)人體內(nèi)大部分細(xì)胞屏障,，到達(dá)的人體部位更多更廣，由此造成的毒副作用會(huì)增加,。

圖6 AccuSizer A7000系列

• 檢測(cè)范圍為0.5μm-400μm（可將下限拓展至0.15μm）

• 0.01μm的超高分辨率,，AccuSizer系列具有1024個(gè)數(shù)據(jù)通道，能反映復(fù)雜樣品的細(xì)微差異,，為研發(fā)及品控保駕護(hù)航

• 靈敏度高達(dá)10PPT級(jí)別,，即使只有微量的顆粒通過(guò)傳感器，也可以精準(zhǔn)檢測(cè)出來(lái)

圖7 LumiSpoc 單粒子顆粒計(jì)數(shù)器儀器外觀

• 快速,、直接測(cè)試穩(wěn)定性,，無(wú)需稀釋?zhuān)瑴囟确秶鷮拸V

• 可同時(shí)測(cè)8個(gè)樣品，測(cè)量及辨別不同的不穩(wěn)定現(xiàn)象及不穩(wěn)定性指數(shù)

• 加速離心,，最高等效2300倍重力加速度

穩(wěn)定性是評(píng)估藥物的常規(guī)項(xiàng)，乳佐穩(wěn)定性影響存放時(shí)間和有效期,，穩(wěn)定性較差的乳佐不僅會(huì)增加運(yùn)輸儲(chǔ)存成本,，還有可能增加用于人體使用的風(fēng)險(xiǎn),。在乳佐制備中，控制尾端大粒子數(shù)量和濃度能使乳佐更為穩(wěn)定,，國(guó)外某公司的重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)了＞1.2μm的液滴濃度^[3],，因?yàn)檫@部分液滴濃度過(guò)高，會(huì)凝聚或者聚結(jié),，從而導(dǎo)致乳液不穩(wěn)定,。

圖8 LUM穩(wěn)定性分析儀

• 快速、直接測(cè)試穩(wěn)定性,，無(wú)需稀釋?zhuān)瑴囟确秶鷮拸V,。

• 可同時(shí)測(cè)8個(gè)樣品，測(cè)量及辨別不同的不穩(wěn)定現(xiàn)象及不穩(wěn)定性指數(shù),。

• 加速離心，最高等效2300倍重力加速度,。

微射流處理后的乳液經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)臑V芯過(guò)濾工藝。過(guò)濾可去除前置工藝流程中的大油滴,，這部分油滴雖然數(shù)目很少,，但這些油滴體積占比較大，且極易成為聚集的成核位點(diǎn),，吸附更多的小液滴,，導(dǎo)致儲(chǔ)藏過(guò)程中乳液穩(wěn)定性降低^[4]。濾膜的材質(zhì)將影響過(guò)濾后的效果,，綜合考量物理攔截,，吸附攔截等效果，選擇適配的濾膜材質(zhì)用于過(guò)濾,，此外,，還需結(jié)合乳液配方考慮相容性穩(wěn)定。

Entegris-Anow是一家高分子微孔膜過(guò)濾企業(yè),，專(zhuān)業(yè)從事MCE,、Nylon、PES,、PVDF,、PTFE等（膜孔徑為0.03μm~10μm）微孔膜的研發(fā)及生產(chǎn)，具有二十多年服務(wù)與醫(yī)藥客戶(hù)經(jīng)驗(yàn),，并為全球生物制藥,、醫(yī)療器械、食品飲料,、實(shí)驗(yàn)室分析,、微電子及工業(yè)等領(lǐng)域的客戶(hù)提供過(guò)濾,、分離和凈化解決方案。

Entegris與Anow的結(jié)合,，引入Entegris質(zhì)量管理體系,，每一支濾芯都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢查，此外,，新建成的CTC驗(yàn)證中心,，為全球客戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)的驗(yàn)證服務(wù)。

參考文獻(xiàn)

[1] The droplet size of emulsion adjuvants has significant impact on their potency, due to differences in immune cell-recruitment and activation.

[2]  WO 2011/067669

[3]  諾華：疫苗佐劑制備中的親水過(guò)濾

[4]  WO 2011/067669