紫外-可見分光光度計的類型很多,但可歸納為三種類型:單光束分光光度計,、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計,。
經(jīng)單色器分光后的一束平行光,輪流通過參比溶液和樣品溶掖,,以進行吸光度的測定,。這種類型的分光光度計結(jié)構(gòu)簡單,操作方便,,維修容易,,適用于常規(guī)分析。
雙光束分光光度計
經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為弧度相等的兩束光,,一束通過參比池,,另一束通過樣品池。光度計能自動比較兩束光的強度,,此比值即為試樣的透射比,,經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。雙光束分光光度計一般都能自動記錄吸收光譜曲線,。由于兩束光同時分別通過參比池和樣品他,,還能自動消除光源強度變化所引起的誤差。
雙波長分光光度計
雙波長分光光度計的優(yōu)點:對于多組分混合物,、混濁試樣(如生物組織液)的分析,,以及存在背景于擾或共存組分吸收干擾的情況下,利用雙波長分光光度法,,往往能提高方法的靈敏度和選擇性,。利用雙波長分光光度計,能獲得導(dǎo)數(shù)光譜,。
紫外可見分光光度計基本定律
1852年,,比爾(Beer)參考了布給爾(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所發(fā)表的文章,提出了分光光度的基本定律,,即液層厚度相等時,,顏色的強度與呈色溶液的濃度成比例,從而奠定了分光光度法的理論基礎(chǔ),這就是**的比爾朗伯定律,。1854年,,杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人將此理論應(yīng)用于定量分析化學(xué)領(lǐng)域,并且設(shè)計了**臺比色計,。到1918年,,美國國家標準局制成了**臺紫外可見分光光度計。此后,,紫外可見分光光度計經(jīng)不斷改進,,又出現(xiàn)自動記錄、自動打印,、數(shù)字顯示,、微機控制等各種類型的儀器,使光度法的靈敏度和準確度也不斷提高,,其應(yīng)用范圍也不斷擴大,。
紫外可見分光光度法從問世以來,在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展,,尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上,,促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng)新,功能更加齊全,,使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍,。