 | 重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司 |
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[供應(yīng)]HY Stemcell HUVEC-C 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品名稱：HUVEC-C 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
英文名稱：Human umbilical vein endothelial cells ,HUV-EC-C
貨號：SCCell-h6003（STR鑒定）
規(guī)格： 1*10 6
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞來源于人靜脈內(nèi)皮，可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆,，在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤。
細(xì)胞特性
1） 來源：人臍帶組織
2） 形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣 貼壁生長
3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途：僅供科研使用,。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況,。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL,，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理,。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收,。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系（推薦：PriMed-iCell-002）
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基 93%
胎牛血清（FBS） 5%
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑 1%
青霉素/鏈霉素,，P/S 1%
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
二,、細(xì)胞處理：
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
- 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
- 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。
3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
下面T25瓶為例,；
- 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度,。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
- 1000rpm離心3-5min,，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息,。
- 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。
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