BeYaMA^TM 1	COMPONENT	VOLUME	STORAGE
500mL Complete Medium（貨號(hào)：HJ0101M）	BeYaMA^TM1 Basal Medium（貨號(hào)：HJ0102M）	400mL	Store at 2～8℃
500mL Complete Medium（貨號(hào)：HJ0101M）	BeYaMA^TM1 5X Supplement（貨號(hào)：HJ0103M）	100mL	Store at -20℃

BeYaMA^TM 1

Juvi^TMHuman iPSC/ESC Growth Medium

人多能干細(xì)胞無血清培養(yǎng)液*實(shí)驗(yàn)操作手冊(cè)

培養(yǎng)皿包被

4℃溶解Matrigel（BD 354277）6小時(shí),，輕搖混勻。請(qǐng)注意：原液應(yīng)是均質(zhì)粘稠的半流體狀態(tài),，要避免溫度過高,，否則Matrigel會(huì)變成凝膠狀態(tài)。
冰上預(yù)冷1.5ml離心管和移液器槍頭,，冰上快速將Matrigel分裝成350-500ul/支,，儲(chǔ)存于-80℃，用前置于4℃解凍,。
將溶解的Matrigel加入25ml預(yù)冷的無血清DMEM/F12培養(yǎng)基中,，輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡,。
將稀釋的Matrigel加入六孔板中，1ml/孔,，輕搖培養(yǎng)板,，使Matrigel均勻鋪在培養(yǎng)板底部。
Parafilm封好包被的培養(yǎng)板,，至于4℃儲(chǔ)存,，用前置于37℃培養(yǎng)箱中孵育至少1小時(shí)。

培養(yǎng)液準(zhǔn)備

在4℃解凍BeYaMA^TM 1 5X Supplement（貨號(hào)：HJ0103M）添加劑,，加入BeYaMA^TM 1 Basal Medium（貨號(hào)：HJ0102M）基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,，形成500mL BeYaMA^TM 1 Complete Medium（貨號(hào)：HJ0101M）*培養(yǎng)基。
BeYaMA^TM 1*培養(yǎng)基可在4℃穩(wěn)定儲(chǔ)存2周,?？砂磳?shí)際用量將BeYaMA^TM 1*培養(yǎng)基分裝后置于-80或-20℃保存，避免反復(fù)凍融,。

hESCs/hiPSCs復(fù)蘇

復(fù)蘇hESCs/hiPSCs前,，復(fù)溫Matrigel包被的培養(yǎng)板，吸棄孔內(nèi)液體,，加入2ml BeYaMA^TM 1*培養(yǎng)液及2ul 5uM/L Rock Inhibitor Y27632,，用以促進(jìn)細(xì)胞貼壁。
從液氮罐中取出hESCs/hiPSCs凍存管,，浸入37℃水浴,，輕輕搖晃，直到細(xì)胞融化至僅剩一小塊冰晶,，迅速取出并用75%酒精擦拭凍存管外表面,，轉(zhuǎn)移至無菌超凈臺(tái)中。
將細(xì)胞懸液接種至準(zhǔn)備好的培養(yǎng)板中，輕輕晃動(dòng)使細(xì)胞均勻分布在板底,。
小心將培養(yǎng)板放置于培養(yǎng)箱中,，避免振動(dòng)。
30-90min后顯微鏡下觀察細(xì)胞基本貼壁,，更換新鮮BeYaMA^TM 1*培養(yǎng)液,，之后每24h換液，4-6天后傳代,。

hESCs/hiPSCs傳代

提前準(zhǔn)備好Matrigel（BD 354277）包被過的六孔板,，吸棄孔內(nèi)包被液，加入2ml BeYaMA^TM 1*培養(yǎng)液,。
吸棄待傳代hESCs/hiPSCs孔內(nèi)的培養(yǎng)液,，并用1ml無鈣鎂的PBS洗1遍。
加入0.5ml Accutase細(xì)胞分離液使之*覆蓋皿底,。
室溫孵育5-8分鐘或37℃孵育3-5分鐘,，顯微鏡下觀察到大部分克隆細(xì)胞間出現(xiàn)間隙，細(xì)胞表面發(fā)亮但尚未相互分離時(shí),，可吸去Accutase,。
可將培養(yǎng)板放置37℃繼續(xù)孵育1min,或者直接加入適量新鮮BeYaMA^TM 1*培養(yǎng)液，輕輕搖晃,，干細(xì)胞集落基本脫落,。亦可用細(xì)胞刮刀將剩余克隆輕輕刮下，盡量避免用槍頭反復(fù)吹打細(xì)胞,。
將制備好的細(xì)胞懸液按1：3 - 1：6的比例接種至準(zhǔn)備好的培養(yǎng)板中,，注意細(xì)胞過密則克隆邊界不圓滑，易分化,，細(xì)胞過稀則克隆存活率降低,。
輕輕搖晃培養(yǎng)板讓細(xì)胞均勻分散，置于37℃,，5% CO²培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6小時(shí),。
每天更換培養(yǎng)液，待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上,，或者克隆*密度過大,，影響細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)進(jìn)行傳代。

如果您在使用BeYaMA^TM 1 Juvi^TM Human iPSC/ESC Growth Medium 人多能干細(xì)胞無血清培養(yǎng)液的過程中,，有任何技術(shù)問題,，我們開通了Juvi科學(xué)家技術(shù)團(tuán)隊(duì)，歡迎您發(fā)郵件到[email protected] 進(jìn)行交流溝通,，我們的目標(biāo)是：推動(dòng)中國(guó)iPS干細(xì)胞技術(shù)走向產(chǎn)業(yè)和臨床,！

重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司主營(yíng)產(chǎn)品：Lonza支原體檢測(cè)試劑盒,Stemcell胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)基,StemRD生長(zhǎng)分化因子 化工儀器網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作,，未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://sorrent.com.cn, All rights reserved.

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干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

干細(xì)胞因子及添加物

細(xì)胞治療產(chǎn)品

細(xì)胞培養(yǎng)耗材

相關(guān)檢測(cè)試劑

其他生物試劑

細(xì)胞凍存

細(xì)胞重編程

蛋白質(zhì)/多肽

抗體/抗原

小型儀器設(shè)備

其他

核酸分析

細(xì)胞株

[供應(yīng)]BeYaMA 1-BeYaMA 1 人多能干細(xì)胞無血清培養(yǎng)液 Juvi Human iPSC/ESC Growth