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細胞培養(yǎng)過程中的注意事項及試劑配制
閱讀：1489發(fā)布時間：2015-12-23
一.常用設(shè)備 準備室的設(shè)備： 單蒸餾水蒸餾器,、雙蒸餾水蒸餾器,、酸缸、烤箱,、高壓鍋,、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品規(guī)（放置消毒過的物品）,、包裝臺,。 配液室的設(shè)備： 扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計（測量培養(yǎng)用液PH值）,、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）,。 培養(yǎng)室的設(shè)備： 液氮罐、儲品柜（存放雜物）,、日光燈和紫外燈,、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱（-80℃）,、空調(diào),、二氧化碳缸瓶、邊臺（書寫實驗記錄）,。必須放在無菌間的設(shè)備：離心機（收集細胞）,、超凈工作臺、倒置顯微鏡,、CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）,、水浴鍋、三氧消毒殺菌機,、4℃冰箱（放置serum和培養(yǎng)用液）,。
二.無菌操作 無菌室的滅菌：
1.定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地,、擦桌子,、超凈工作臺等，然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅或者0.5％過氧乙酸擦拭,。
2.CO2孵箱（培養(yǎng)箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭,，然后用75％酒精擦拭或者0.5％過氧乙酸，再用紫外燈照射
3.實驗前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機,、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘
4.實驗后滅菌：用75％酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺,、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺,。 實驗人員的無菌準備： 1.肥皂洗手,。 2.穿好隔離衣、帶好隔離帽,、口罩,、放好拖鞋 3.用75％酒精棉球擦凈雙手。 無菌操作的演示： 1.凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精,、PBS,、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面 2.靠近酒精燈火焰操作,。 3.器皿使用前必須過火滅菌 4.繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋,、滴管）要放在高處，使用時仍要過火,。
5.各種操作要靠近酒精燈,，動作要輕、準確,，不能亂碰,。如吸管不能碰到廢液缸。
6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管,，防止交叉污染,。
三.器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消：
(1)新的玻璃器皿的洗消：
1.自來水刷洗，除去灰塵,。
2.烘干,、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀鹽酸中12小時以除去臟物,、鉛,、砷等物。
3.刷洗,、烘干：12小時后立即用自來水沖洗,，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干,。
4.泡酸,、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次,，zui后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次,。
5.烘干,、包裝：洗干凈后先烘干,，然后用牛皮紙（油光紙）包裝,。
6.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開開關(guān)和安全閥,，當(dāng)蒸氣成直線上升時,，關(guān)閉安全閥，當(dāng)指針指向15磅時,，維持20-30分鐘,。
7.高壓消毒后烘干
(2)舊的玻璃器皿的洗消：
1．刷洗、烘干：使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中,，泡過來蘇爾溶液（洗滌劑）的器皿要用清水刷洗干凈,，然后烘干。
2.泡酸,、清洗：烘干后泡入清潔液（酸液）,，12小時后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來水沖洗（避免蛋白質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗），再用蒸餾水沖洗3次,。
3.烘干,、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙（油光紙）等包裝，以便于消毒儲存及防止灰塵和再次被污染,。
4.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi),，蓋好蓋子，打開開關(guān)和安全閥,，隨著溫度的上升安全閥冒出蒸氣,，當(dāng)蒸氣成直線冒出3-5分鐘后，關(guān)閉安全閥,，氣壓表指數(shù)隨之上升,，當(dāng)指針指向15磅時，調(diào)節(jié)電開關(guān)維持20-30分鐘即可,。（玻璃培養(yǎng)瓶消毒前可將膠帽輕輕蓋上）
5.烘干備用：因為高壓消毒后器皿會被蒸氣打濕,，所以要放入烤箱內(nèi)烘干備用。 金屬器械洗消： 金屬器皿不能泡酸,，洗消時可先用洗滌劑刷洗,，后用自來水沖干凈，然后用75％酒精擦拭,，再用自來水,，然后用蒸餾水沖洗，再烘干或空氣中晾干,。放入鋁制盒內(nèi)包裝好在高壓鍋內(nèi)15磅高壓（30分鐘）消毒,，再烘干備用,。
注意事項： 1.嚴格執(zhí)行高壓鍋的操作規(guī)程：高壓消毒時，先檢查鍋內(nèi)是否有蒸餾水,，以防高壓時燒干,，水不能過多因為其將使空氣流暢受阻，會降低高壓消毒效果,。檢查安全閥是否通暢,，以防高壓時爆炸。 2.安裝濾膜時注意光面朝上：注意濾膜光滑一面是正面,，要朝上,，否則起不到過濾的作用。 3.注意人體的防護和器皿的*浸泡：A.泡酸時要戴耐酸手套,，防止酸液濺起傷害人體,。B.從酸缸內(nèi)撈取器皿時防止酸液濺到地面，會腐蝕地面,。C.器皿浸入酸液中要*,，不能留有氣泡，以防止泡酸不*,。 四.細胞培養(yǎng)用液的配制與消毒
二.無菌操作 無菌室的滅菌：
1.定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地,、擦桌子,、超凈工作臺等，然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅或者0.5％過氧乙酸擦拭,。
2.CO2孵箱（培養(yǎng)箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭,，然后用75％酒精擦拭或者0.5％過氧乙酸，再用紫外燈照射
3.實驗前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機,、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘
4.實驗后滅菌：用75％酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺,、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺,。 實驗人員的無菌準備： 1.肥皂洗手,。 2.穿好隔離衣、帶好隔離帽,、口罩,、放好拖鞋 3.用75％酒精棉球擦凈雙手。 無菌操作的演示： 1.凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精,、PBS,、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面 2.靠近酒精燈火焰操作,。 3.器皿使用前必須過火滅菌 4.繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋,、滴管）要放在高處，使用時仍要過火,。
5.各種操作要靠近酒精燈,，動作要輕、準確,，不能亂碰,。如吸管不能碰到廢液缸。
6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管,，防止交叉污染,。
三.器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消：
(1)新的玻璃器皿的洗消：
1.自來水刷洗，除去灰塵,。
2.烘干,、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀鹽酸中12小時以除去臟物,、鉛,、砷等物。
3.刷洗,、烘干：12小時后立即用自來水沖洗,，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干,。
4.泡酸,、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次,，zui后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次,。
5.烘干,、包裝：洗干凈后先烘干,，然后用牛皮紙（油光紙）包裝,。
6.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開開關(guān)和安全閥,，當(dāng)蒸氣成直線上升時,，關(guān)閉安全閥，當(dāng)指針指向15磅時,，維持20-30分鐘,。
7.高壓消毒后烘干
(2)舊的玻璃器皿的洗消：
1．刷洗、烘干：使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中,，泡過來蘇爾溶液（洗滌劑）的器皿要用清水刷洗干凈,，然后烘干。
2.泡酸,、清洗：烘干后泡入清潔液（酸液）,，12小時后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來水沖洗（避免蛋白質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗），再用蒸餾水沖洗3次,。
3.烘干,、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙（油光紙）等包裝，以便于消毒儲存及防止灰塵和再次被污染,。
4.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi),，蓋好蓋子，打開開關(guān)和安全閥,，隨著溫度的上升安全閥冒出蒸氣,，當(dāng)蒸氣成直線冒出3-5分鐘后，關(guān)閉安全閥,，氣壓表指數(shù)隨之上升,，當(dāng)指針指向15磅時，調(diào)節(jié)電開關(guān)維持20-30分鐘即可,。（玻璃培養(yǎng)瓶消毒前可將膠帽輕輕蓋上）
5.烘干備用：因為高壓消毒后器皿會被蒸氣打濕,，所以要放入烤箱內(nèi)烘干備用。 金屬器械洗消： 金屬器皿不能泡酸,，洗消時可先用洗滌劑刷洗,，后用自來水沖干凈，然后用75％酒精擦拭,，再用自來水,，然后用蒸餾水沖洗，再烘干或空氣中晾干,。放入鋁制盒內(nèi)包裝好在高壓鍋內(nèi)15磅高壓（30分鐘）消毒,，再烘干備用,。
注意事項： 1.嚴格執(zhí)行高壓鍋的操作規(guī)程：高壓消毒時，先檢查鍋內(nèi)是否有蒸餾水,，以防高壓時燒干,，水不能過多因為其將使空氣流暢受阻，會降低高壓消毒效果,。檢查安全閥是否通暢,，以防高壓時爆炸。 2.安裝濾膜時注意光面朝上：注意濾膜光滑一面是正面,，要朝上,，否則起不到過濾的作用。 3.注意人體的防護和器皿的*浸泡：A.泡酸時要戴耐酸手套,，防止酸液濺起傷害人體,。B.從酸缸內(nèi)撈取器皿時防止酸液濺到地面，會腐蝕地面,。C.器皿浸入酸液中要*,，不能留有氣泡，以防止泡酸不*,。 四.細胞培養(yǎng)用液的配制與消毒
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